Search
Identification, cloning, expression, and characterizationof a highly thermostable single-stranded-DNA-binding protein (SSB) from Deinococcus murrayi
Abstract
Zidentyfikowano i scharakteryzowano białko SSB-podobne, pochodzące z Deinococcus murrayi (DmuSSB). Otrzymany w reakcji PCR fragment zawierający kompletny gen ssb sklonowano w systemie ekspresyjnym Escherichia coli. Gen składa się z 826 nt, kodujących 276 reszt aminokwasowych z wyliczoną teoretycznie masą cząsteczkową monomeru równą 30,14 kDa. DmuSSB zawiera dwie domeny wiążące jednoniciowe DNA OBna monomer I funkcjonuje jako homodimer. W eksperymencie wygaszania naturalnej fluorescencji tryptofanów w białku z poly(dT) DmuSSB wiąże 27-32 nt w zależności od stężenia soli, a fluorescencja była wygaszana w 62%. W eksperymentach badania zdolności komplementacji funkcji EcoSSB in vivo wykazano, że DmuSSB spełnia funkcje EcoSSB. DmuSSB wykazuje 100% aktywności po 120 min. inkubacji w 80°C oraz charakteryzuje się okresem półtrwania wynoszącym 50 min w 95°C, 40 min. w 100°C i 35 min. w 105°C. DmuSSB jest najbardziej termostabilnym białkiem SSB, znanym do tej pory i jest atrakcyjną alternatywą dla TaqSSB i TthSSB w zastosowaniach biologii molekularnej i metodach analitycznych.
Authors (3)
Cite as
Full text
full text is not available in portal
Keywords
Details
- Category:
- Articles
- Type:
- artykuł w czasopiśmie z listy filadelfijskiej
- Published in:
-
PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION
no. 53,
pages 201 - 208,
ISSN: 1046-5928 - Language:
- English
- Publication year:
- 2007
- Bibliographic description:
- Filipkowski P., Duraj-Thatte A., Kur J.: Identification, cloning, expression, and characterizationof a highly thermostable single-stranded-DNA-binding protein (SSB) from Deinococcus murrayi// PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION. -Vol. 53., (2007), s.201-208
- Verified by:
- Gdańsk University of Technology
seen 116 times