Abstract

Dzięki zastosowaniu lipaz możliwa jest biotechnologiczna produkcja m.in. biodegradowalnych biopolimerów, biopaliw (tzw. biodiesel), wielu terapeutyków, herbicydów, pestycydów, kosmetyków, substancji smakowych, serów i in. Szczególnie interesującą grupę stanowią enzymy lipolityczne, pochodzące z organizmów psychrofilnych i psychrotrofowych, ze względu na zdolność do wydajnego katalizowania reakcji w temperaturach rzędu 10-20 ºC. Umożliwia to zastosowanie tych enzymów w niskich temperaturach, do produkcji związków labilnych termicznie lub w przypadkach, gdy podwyższenie temperatury reakcji jest niepożądane np. ze względu na pogorszenie cech organoleptycznych produktu lub możliwość zakażenia bakteriami mezofilnymi. Do badań użyto szczep 643A morskiej bakterii antarktycznej, pochodzący z kolekcji mikroorganizmów antarktycznych Instytut Biochemii Technicznej PŁ, wyselekcjonowany jako potencjalne źródło zimnolubnej lipazy. Przeprowadzono wstępną identyfikację gatunkową tego szczepu na podstawie uzyskanej sekwencji nukleotydowej genu kodującego 16S rRNA. Analiza filogenetyczna pozwoliła na zaklasyfikowanie szczepu 643A do rodzaju Pseudoalteromonas sp. Następnie skonstruowano bibliotekę fragmentów genomowego DNA tego szczepu, która umożliwiła identyfikację, izolację i poznanie sekwencji nukleotydowej genu kodującego zimnolubną lipazy klasy GDSL. Poznanie tej sekwencji umożliwiło sklonowanie genu kodującego zimnolubną lipazę do układu ekspresyjnego E. coli ER2566. Uzyskano wydajną ekspresję białka i rozpoczęto przygotowanie do oczyszczaniu enzymu z zastosowaniem frakcjonowanego strącania siarczanem amonu, oraz technik chromatografii jonowymiennej i filtracji żelowej. Uzyskany preparat preparat zimnolubnej lipazy posłuży do dalszych badań, w tym charakterystyki biochemicznej enzymu i oceny jego przydatności w aplikacjach przemysłowych.

Authors (8)