Abstract

Biogeneza fimbrii Dr kodowanych przez operon dra uropatogennych szczepów Escherichia coli (infekcje górnych dróg moczowych) odbywa się na bazie zakonserwowanego systemu sekrecji typu chaperone-usher. Funkcjonowanie powyższego systemu sekrecji opiera się na dwóch komponentach białkowych, periplazmatycznym chaperonie DraB i zewnątrzbłonowym kanale DraC. Białko DraB kontroluje proces składania podjednostek fimbrialnych DraE, natomiast białko DraC stanowi platformę polimeryzacyjną i sekrecyjną podjednostek DraE w liniowe struktury fimbrialne. W przedstawionej pracy, wykonano ukierunkowaną mutagenezę fragmentu genu draC kodującego N-terminalną domenę periplazmatyczną kanału DraC w celu wyselekcjonowania reszt aminokwasowych krytycznych w procesie biogenezy fimbrii Dr. Zmutowane białka DraC, DraC-F4A, DraC-C64, DraC-C100A i DraC-W142A w spoób znaczący zredukowały właściwości adhezyjne rekombinowanych szczepów E. coli. Aktywność biologiczna mutantów DraC jako platformy biogenezy fimbrii Dr została zweryfikowana za pomocą testu hemaglutynacji ludzkich erytrocytów i testu adherencji do receptora DAF zlokalizowanego na powierzchni komórek linii komórkowych CHO-DAF+ i HeLa. Reszta aminokwasowa F4 białka DraC zakonserwowana pośród białek kanałotwórczych organelli adhezyjnych, podlegających biogenezie przy udziale chaperonów rodziny FGL i FGS, może zostać wykorzystana do projektowania specyficznych pilicydów, blokujących proces asocjacji podjednostek DraE w strukturę fimbrii Dr. Ze względu na 100% identyczność sekwencji nukleotydowych genów draC i afaC-III zasięg pilicydowych inhibitorów determinat wirulentnych może zostać również rozszerzony na uropatogenne szczepy E. coli (infekcje dolnych dróg moczowych) kodujące operon afa-3. Wykonane badania w pełni dowodzą kluczowej roli N-terminalnej domeny białka DraC w biogenezie fimbrii Dr.

Citations

Authors (5)