Gen kodujący alfa-amylazę z Pyrococcus woesei klonowano do plazmidów pET21d(+)lub pYTB2, którymi transformowano komórki Escherichia coli. Otrzymana rekombinantowa alfa amylaza wykazuje maksymalną aktywność przy pH 5.6 w temperaturze 95 stC i przejawia około 24 % początkowej aktywności nawet po 2 godz. inkubacji w 120 stC. Duża termostabilność otrzymanego preparatu świadczy o jego przydatności do enzymatycznego upłynniania skrobi.

Opracowano metodę izolowania oraz zbadano właściwości enzymu otrzymanego ze szczepu Escherichia coli zawierającego gen kodujący termostabilną beta-ga-laktozydazę z Pyrococcus woesei.

Gen kodujący termostabilną beta-D-galaktozydazę Pyrococcus woesei zamplifikowano z zastosowaniem techniki PCR i klonowano w komórkach Escherichia coli. Skonstruowany system ekspresji genu pozwolił na uzyskanie znacznej ilości termostabilnego białka w komórkach mezofilnego gospodarza. Enzym oczyszczono z zastosowaniem chromatografii powinowactwa po wcześniejszej denaturacji termicznej białek Escherichia coli i scharakteryzowano...

Thermostable β-galactosidase from Escherichia coli transformant containing theenzyme gene from Pyrococcus woesei was immobilized on alginate gel.The benefits of using whole bacterial cells not only exclude expensive, laborious proteinisolation and purification but also stabilize enzymes by cytosol components. Increase inproductivity of enzyme can be achieved by cells permeabilization. To increase permeability ofcytoplasmic membrane...

Przedstawiono wyniki badań dotyczących skuteczności transformacji laktozy katalizowanej immobilizowanymi w żelu alginianowym rekombinantowymi komórkami Escherichia coli, transformowanymi genem b-galaktozydazy z Pyrococcus woesei. Wykazano, że aktywność hydrolityczna rekombinantowych komórek wzrasta o 35% po permeabilizacji w środowisku 40% etanolu. Optymalna temperatura i pH katalizowanej reakcji wynosiły odpowiednio 98C i 5,4....