Abstract

Dermatofity należą do blisko spokrewnionej grupy grzybów, które wykazują wysokie powinowactwo do skeratynizowanych tkanek. Cecha ta czyni je odpowiedzialnymi za powierzchniowe grzybice skóry, paznokci oraz włosów. Szacuje się, iż nawet do 20% ludzi na całym świecie dotkniętych jest infekcjami powodowanymi przez dermatofity. Ich leczenie wymaga długotrwałego zastosowania leków przeciwgrzybiczych. W celu dobrania odpowiedniego leczenia należy zapewnić prawidłową diagnozę, która przy zastosowaniu konwencjonalnych metod jest nie tylko długotrwała, ale również kosztowna, jak i wymaga wieloletniego doświadczenia diagnosty. Biorąc powyższe pod uwagę, niezmiernie istotne jest stworzenie szybkiego i prostego testu diagnostycznego, opartego na metodach molekularnych, który zapewni identyfikację gatunkową. Celem badań prowadzonych w ramach niniejszej pracy doktorskiej było opracowanie testu diagnostycznego, który w pierwszym etapie wykrywałby dermatofity, a w drugim etapie zapewniłby identyfikację gatunkową oraz co wydawało się największym wyzwaniem opracowanie jednoetapowej metody przygotowania DNA, które mogłoby być stosowane w technice Real-Time PCR. W pierwszym etapie pracy wykazano możliwość zastosowanie DNA wyizolowanego szybką, dwuetapową w reakcjach Real-Time PCR przy użyciu starterów wykrywających DNA wszystkich dermatofitów oraz starterów wykrywających DNA gatunku Trichophyton rubrum. Następnie, zostały zaprojektowane startery umożliwiające wykrycie DNA gatunków Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, Microsporum audouinii/Microsporum ferrugineum oraz kompleksu Trichophyton mentagrophytes. Zaprojektowane układy przetestowano na 246 izolatach oraz wstępnie potwierdzono możliwość ich zastosowania z użyciem próbek klinicznych. Na sam koniec opracowano nową metodę szybszej izolacji DNA dermatofitów, charakteryzującą się mniejszym ryzykiem kontaminacji w porównaniu z istniejącymi metodami.

Author (1)