Identification, cloning, expression, and characterizationof a highly thermostable single-stranded-DNA-binding protein (SSB) from Deinococcus murrayi - Publication - Bridge of Knowledge

Search

Identification, cloning, expression, and characterizationof a highly thermostable single-stranded-DNA-binding protein (SSB) from Deinococcus murrayi

Abstract

Zidentyfikowano i scharakteryzowano białko SSB-podobne, pochodzące z Deinococcus murrayi (DmuSSB). Otrzymany w reakcji PCR fragment zawierający kompletny gen ssb sklonowano w systemie ekspresyjnym Escherichia coli. Gen składa się z 826 nt, kodujących 276 reszt aminokwasowych z wyliczoną teoretycznie masą cząsteczkową monomeru równą 30,14 kDa. DmuSSB zawiera dwie domeny wiążące jednoniciowe DNA OBna monomer I funkcjonuje jako homodimer. W eksperymencie wygaszania naturalnej fluorescencji tryptofanów w białku z poly(dT) DmuSSB wiąże 27-32 nt w zależności od stężenia soli, a fluorescencja była wygaszana w 62%. W eksperymentach badania zdolności komplementacji funkcji EcoSSB in vivo wykazano, że DmuSSB spełnia funkcje EcoSSB. DmuSSB wykazuje 100% aktywności po 120 min. inkubacji w 80°C oraz charakteryzuje się okresem półtrwania wynoszącym 50 min w 95°C, 40 min. w 100°C i 35 min. w 105°C. DmuSSB jest najbardziej termostabilnym białkiem SSB, znanym do tej pory i jest atrakcyjną alternatywą dla TaqSSB i TthSSB w zastosowaniach biologii molekularnej i metodach analitycznych.

Cite as

Full text

full text is not available in portal

Keywords

Details

Category:
Articles
Type:
artykuł w czasopiśmie z listy filadelfijskiej
Published in:
PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION no. 53, pages 201 - 208,
ISSN: 1046-5928
Language:
English
Publication year:
2007
Bibliographic description:
Filipkowski P., Duraj-Thatte A., Kur J.: Identification, cloning, expression, and characterizationof a highly thermostable single-stranded-DNA-binding protein (SSB) from Deinococcus murrayi// PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION. -Vol. 53., (2007), s.201-208
Verified by:
Gdańsk University of Technology

seen 69 times

Recommended for you

Meta Tags