Abstrakt

Drożdżaki z rodzaju Candida należą do jednych z najczęściej izolowanych czynników etiologicznych zakażeń krwi. Szybka i bezbłędna identyfikacja gatunkowa pozwala na wdrożenie odpowiedniego leczenia i zwiększa szansę na powodzenie terapii. Celem badań była konstrukcja nowych układów wykorzystujących narzędzia diagnostyki molekularnej do specyficznej identyfikacji gatunkowej i rodzajowej drożdżaków Candida. Poszukiwano również nowych celów molekularnych do diagnostyki tego rodzaju zakażeń. W wyniku realizacji planów badawczych skonstruowano 16 układów diagnostycznych opartych o metody amplifikacji kwasów nukleinowych: PCR, real-time PCR oraz metodę PCR tRFLP wykorzystującą enzymy restrykcyjne. Do tworzenia układów diagnostycznych wykorzystano 3 zupełnie nowe cele molekularne w diagnostyce drożdżaków: gen syntazy homocytrynianowej (lys21), akonitazy (aco2) i enolazy (eno1). Zaprojektowano też nowe układy diagnostyczne w oparciu o gen trf4 kodujący topoizomerazę. Wszystkie opracowane układy zweryfikowano pod kątem specyficzności oraz wstępnie zwalidowano na puli 104 szczepów klinicznych uzyskując poprawne wyniki identyfikacji. W ramach pracy zaproponowano też metodę przeciwdziałania inhibicji reakcji PCR bezpośrednio na próbkach krwi poprzez zwiększenie ilości polimerazy w mieszaninie reakcyjnej. Opracowano również procedurę diagnostyczną do identyfikacji gatunkowej drożdżaków bezpośrednio z pozytywnych hodowli krwi w butelkach w systemie BactAlert®.

Autor (1)