Filters
total: 195
Search results for: ITS-PCR
-
Isolation of Human Progenitor Epidermal Cells on Collagen Type IV and Analysis of Their Markers with Flow Cytometry and PCR Methods
PublicationEpidermal stem cells, located in the skin, together with keratinocytes are transplanted in regenerative therapies, e.g., for the treatment of burns or other wounds. Here, we describe the protocol of their enzymatic isolation from human skin. It includes separation of the epidermis form the dermis by incubation with dispase followed by cell isolation for epidermis by digestion with trypsin. Cell isolated with this method can be...
-
Fusion of DNA-binding domain of Pyrococcus furiosus ligase with TaqStoffel DNA polymerase as a useful tool in PCR with difficult targets
PublicationThe DNA coding sequence of TaqStoffel polymer- ase was fused with the DNA-binding domain of Pyrococcus furiosus ligase. The resulting novel recombinant gene was cloned and expressed in E. coli. The recombinant enzyme was purified and its enzymatic features were studied. The fusion protein (PfuDBDlig-TaqS) was found to have enhanced processivity as a result of the conversion of the Taq DNA polymerase from a relatively low processive...
-
PCR-Based Genotyping of Mycobacterium tuberculosis with New GC-Rich Repeated Sequences and IS6110 Inverted Repeats Used as Primers.
PublicationW pracy przedstawiono nową metodę genotypowania Mycobacterium tuberculosis. Zastosowanie oligonukleotydu Mtb1 5'-CCG-GCG-GGG-CCG-GCG-G lub Mtb2 5'-CGG-CGG-CAA-CGG-CGG-C wraz z oligonukleotydami specyficznymi do terminalnych sekwencji elementu insercyjnego IS6110 pozwala na różnicowanie szczepów Mycobacterium tuberculosis w metodzie PCR. Opracowana metoda może być wykorzystana w badaniach epidemiologicznych gruźlicy.
-
PCR amplification with primers based on IS2404 and GC-rich repeated sequence reveals polymorphism in Mycobacterium ulcerans
PublicationOpracowano prostą w wykonaniu metodę genotypowania szczepów bakterii z gatunku Mycobacterium ulcerans. Polimorfizm genetyczny 32 badanych izolatów Mycobacterium ulcerans odzwierciedla ich geograficzne pochodzenie z rejonów Afryki Centralnej, Ameryki Południowej i Łacińskiej, Azji Południowo-Wschodniej, Malezji oraz Australii.
-
PCR Melting Profile method for genotyping analysis of vancomycin-resistant Enterococcus faecium isolates from Hematological Unit patients
PublicationW ostatnich latach znacząco wzrasta liczba szczepów Enterococcus opornych na wankomycynę. Stwarzają one problemy medyczne u pacjentów skolonizowanych czy zainfekowanych tymi drobnoustrojami. W przedstawionych badaniach, określiliśmy genetyczne podobieństwo pomiędzy izolatami E. faecium VRE, pozyskiwanymi w okresie od kwietnia 2003 do kwietnia 2005 od pojedynczych pacjentów oddziału Hematologicznego Specjalistycznego Publicznego...
-
A New Double Digestion Ligation Mediated Suppression PCR Method for Simultaneous Bacteria DNA-Typing and Confirmation of Species: An Acinetobacter sp. Model
PublicationWe have designed a new ddLMS PCR (double digestion Ligation Mediated Suppression PCR) method based on restriction site polymorphism upstream from the specific target sequence for the simultaneous identification and differentiation of bacterial strains. The ddLMS PCR combines a simple PCR used for species or genus identification and the LM PCR strategy for strain differentiation. The bacterial identification is confirmed in the...
-
Highly thermostable RadA protein from the archaeon Pyrococcus woesei enhances specificity of simplex and multiplex PCR assays
Publication -
Różnicowanie C. albicans i C. dubliniensis w oparciu o polimorfizm genu syntazy homocytrynianowej z wykorzystaniem metody PCR RFLP
PublicationNajczęstszym czynnikiem etiologicznym zakażeń wywołanych przez drożdżaki z rodzaju Candida jest C. albicans. Gatunek ten posiada bardzo zbliżone cechy fenotypowe do C. dubliniensis co często wiąże się z błędną identyfikacją. Skutkuje to wtórnym zakażeniem wywołanym przez współwystepujący gatunek C. dubliniensis, który nabywa oporność na flikonazol stosowany w terapii C. albicans. Celem badań była konstrukcja układu diagnostycznego...
-
Amplification of a single-locus variable-number direct-repeats with restriction fragment length polymorphism (DR-PCR/RFLP) for genetic typing of Acinetobacter baumannii strains
PublicationW celu poszukiwania nowych metod typowania genetycznego szczepów Acinetobacter baumannii przydatnych w szpitalnych badaniach epidemiologicznych przeprowadzono analizę dostępnych w banku genów sekwencji szczepów referencyjnych na obecność nowych motywów repetytywnych. Do badania polimorfizmu sekwencji repetytywnych w szczepach Acinetobacter sp. wykorzystano proste powtórzenia typu "direct repeat" (DR) zlokalizowane w jednym miejscu...
-
Identification of Powdery Mildew Blumeria graminis f. sp. tritici Resistance Genes in Selected Wheat Varieties and Development of Multiplex PCR
Publication -
Enterococci from ready-to-eat food - horizontal gene transfer of antibiotic resistance genes and genotypic characterization by PCR melting profile
Publication -
One-tube cell lysis and DNA extraction procedure for PCR based detection of Mycobacterium ulcerans in aquatic insects, molluscs and fish.
PublicationMycobacterium ulcerans jest bakterią wywołującą choroby skóry u ludzi i zwierząt. W trakcie prowadzonych badań opracowano prostą w wykonaniu metodę ekstrakcji DNA Mycobacterium ulcerans z próbek środowiskowych oraz klinicznych. Opracowana metoda izolacji DNA może być przydatna w badaniu źródeł infekcji oraz dróg szerzenia się Mycobacterium ulcerans.
-
Motility activity, slime production, biofilm formation and genetic typing by ERIC-PCR for Pseudomonas aeruginosa strains isolated from bovine and other sources (human and environment)
PublicationThe molecular-typing strategy, ERIC-PCR was used in an attempt to determine the genomic relationship of 28 P. aeruginosa strains isolated from faeces of healthy bovine, bovine mastitis and from faeces of hospital patients as well as from environment. ERIC-PCR fingerprinting revealed large molecular differentiation within this group of isolates. Twenty two out of 28 strains tested generated unique patterns of DNA bands and only...
-
Discovery and characterization of RecA protein of thermophilic bacterium Thermus thermophilus MAT72 phage Tt72 that increases specificity of a PCR-based DNA amplification
Publication -
Use of rapid immunochromatographic tests and PCR for the detection of vaccine viruses (CPV, CDV CAV) in faeces and conjunctival sac swabs of vaccinated dogs
Publication -
Identification of leaf rust resistance genes Lr34 and Lr46 in common wheat (Triticum aestivum L. ssp. aestivum) lines of different origin using multiplex PCR
Publication -
Identification and cloning of C. albicans SC5314 genes encoding L-methionine biosynthetic pathway enzymes.
Open Research DataEnzymes of fungal L-methionine biosynthetic pathway: homoserine O-acetyltransferase (Met2p), O-acetylhomoserine sulfhydrylase (Met15p) and cystathionine-γ-synthase (Str2p) could be exploited as molecular targets for antifungal chemotherapy. The goal of the study was to identify and clone genes encoding mentioned above enzymes. MET2, MET15 and STR2 genes...
-
Retrospective analysis of genetic diversity of Klebsiella oxytoca isolated in Poland over a 50-year period.
PublicationAnaliza genetyki populacji i określenie powiązań filogenetycznych pomiędzy szczepami może być niezwykle użytecznym podejściem w określaniu rozprzestrzeniania się wzorów genetycznych różnych gatunków bakterii na potrzeby epidemiologiczne. Nie ma danych, które opisywałyby długoterminowe sytuacje epidemiologiczne powodowane przez wielolekooporne, oportunistyczne szczepy Klebsiella oxytoca metodami molekularnymi. Celem przedstawionych...
-
Antiviral activity of bee bread derived from polish apiaries.
Open Research DataBee bread is a product of fermentation of bee-collected pollen and revealed a high nutritional value. Other bee products, such as honey and propolis, are known for their antiviral activity, but bee bread is still under investigation, thus its antiviral potential is still unspecified. For investigation antiviral activity of bee bread samples, cytotoxicity...
-
Phylogenetic trees of genus Oncidium Sw. based on analysis of DNA sequences
Open Research DataGenus Oncidium Sw. is widely regarded as a polyphiletic, and the taxonomic boundaries between him and such genera as Odontoglossum Kunth. or Miltonia Lindley remain blurred. The goal of the study was to determine the phylogenetic relationships within the genus Oncidium s.lato based on the DNA sequences analysis. The correlation between molecular data...
-
Fuzyjne polimerazy DNA – otrzymywanie, charakterystyka i zastosowanie
PublicationObecnie reakcje PCR (ang. Polymerase Chain Reaction) wykazują bardzo szerokie zastosowanie w diagnostyce medycznej, biologii molekularnej czy inżynierii genetycznej. Efektywność tych reakcji rozumiana jako wydajność i wierność przeprowadzonej amplifikacji jest nieodłącznie związana ze stosowaną polimerazą DNA i warunkami prowadzenia reakcji PCR. Aby sprostać wymaganiom stawianym przez nowoczesne metody diagnostyczne oraz współczesną...
-
A universal method for the identification of genes encoding amatoxins and phallotoxins in poisonous mushrooms
PublicationABSTRACT Background. As the currently known diagnostic DNA targets amplified in the PCR assays for detection of poisonous mushrooms have their counterparts in edible species, there is a need to design PCR primers specific to the genes encoding amanitins and phallotoxins, which occur only in poisonous mushrooms. Objective. The aim of the study was testing of PCR-based method for detection of all genes encoding hepatotoxic cyclic...
-
A new assay for the simultaneous identification and differentiation of Klebsiella oxytoca strains.
PublicationKlebsiella oxytoca is the second most frequently identified species of Klebsiella isolated from hospitalized patients. Klebsiella spp. is difficult to identify using conventional methods and is often misclassified in clinical microbiology laboratories. K. oxytoca is responsible for an increasing number of multi-resistant infections in hospitals because of insufficient detection and identification. In this study, we propose a new...
-
Increased concentration of Taq DNA polymerase as a solution for GC-rich templates from clinical and environmental samples
PublicationDNA polymerase is an enzyme which plays crucial role in replication and DNA repair. It found application in PCR (polymerase chain reaction) where catalyses process of in vitro DNA synthesis. To meet the demands posed by mod- ern diagnostic, molecular biology or genetic engineering it is necessary to improve DNA polymerases to obtain new or better features useful in these fields. So far implemented modifications in majority are...
-
Five-hour diagnosis of dermatophyte nail infections with specific detection of Trichophyton rubrum
PublicationW publikacji przedstawiono szybką dwuetapową metodę oczyszczania DNA oraz opartą na technice multiplex PCR metodę wykrywania grzybów z rodzaju dermatofitów oraz gatunku Trichophyton rubrum z hodowli grzybów oraz bezpośrednio ze zmienionych chorobowo paznokci. Testy stu osiemnastu próbek z użyciem zaprojektowanej reakcji multiplex PCR i dwóch kolejnych (jedna wykrywająca grzyby z rodzaju dermatofitów, druga wykrywająca gatunek T....
-
The effect of anthraquinone derivatives on telomerase activity
Open Research DataThe data set contains images of the PCR products obtained from the Telomerase Repeated Amplification Protocol (TRAP). The effect of anthraquinone derivatives (TXT1-TXT9) on telomerase activity was comparatively examined using the following reference compounds: BIBR1532, TMPyP4 and mitoxantrone (MTX).
-
The effect of anthraquinone derivatives (C1-C9) on telomerase activity
Open Research DataThe data set contains images of the PCR products obtained from the Telomerase Repeated Amplification Protocol (TRAP). The effect of anthraquinone derivatives (C-C9) on telomerase activity was analyzed using lysates from drug-treatedcancer cell line.
-
Molecular detection of Candida krusei
PublicationThe species identification of fungi belonging to genus Candida is an important issue as this genus becomes the emerging problem of nosocomial infections. As Candida krusei presents intrinsicresistance to the fluconazole that is the drug of the first choice in case of invasive candidiasis the PCR identifying the DNA of C. krusei was elaborated. The analytical sensitivity of the assay on spiked blood samples was estimated at 3-5...
-
Sequences of internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2 of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi
Open Research DataDNA encoding ITS1-5.8S-ITS2 fragments of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi named Red, Pink and Black were PCR amplified using ITS1 5' TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3' and ITS4 5’ TCCTCCGCTTATTGATATGC 3’ primers and sequenced by Sanger method using the same primers.
-
Genotyping and characterization of virulence factors in Escherichia coli strains isolated from patients from Polish hospital
PublicationZakażenia układu moczowego (UTIs - ang. urinary track infections) są jedną z najczęstszy infekcji, za które w 85% przypadków odpowiedzialne są bakterie Escherichia coli. Infekcje układu moczowego mogą prowadzić do groźnych powikłań m. in. odmiedniczkowego zapalenia nerek. Śmiertelność wśród tej grupy pacjentów wynosi 1-3%. Zakażenia układu moczowego występują również u ok. 7% kobiet ciężarnych. W pracy przebadano 82 szczepy E....
-
Fusion of Taq DNA polymerase with single-stranded DNA binding-like protein of Nanoarchaeum equitans—Expression and characterization
PublicationDNA polymerases are present in all organisms and are important enzymes that synthesise DNA molecules. They are used in various fields of science, predominantly as essential components for in vitro DNA syntheses, known as PCR. Modern diagnostics, molecular biology and genetic engineering need DNA polymerases which demonstrate improved performance. This study was aimed at obtaining a new NeqSSB-TaqS fusion DNA polymerase from the...
-
Structure and the Biochemical Potential of the Bacterial Community in Wastewater Treatment Plant Effluent and in Receiving Waters: Northern Poland Case Study
PublicationWastewater treatment processes are monitored mainly in terms of biogenic substance removal efficiency. Little is known about the treated wastewater microbiome and its influence on the recipient. In this study, a wide range of methods (cultivation, microscopic analysis, New Generation Sequencing and Real Time PCR) were employed to determine the bacterial community composition of the treated wastewater and its receiver. Preliminary...
-
Sequences of large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence encoding D1/D2 domain of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi
Open Research DataDNA fragments encoding D1/D2 domain of large subunit ribosomal RNA of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi named Red, Pink and Black were PCR amplified using NL1 5’ GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG 3’ and NL4 5’ GGTCCGTGTTTCAAGACGG 3’ primers and sequenced by Sanger method using the same primers.
-
The study of the influence of ZnO nanoparticles on pyocyanin production - the optimization of production and the study of the physiological response of the cells
Open Research DataThis dataset presents the in-depth analysis of the influence of zinc oxide nanoparticles on pyocyanin production.
-
Genotyping of clinical isolates of fluconazole-resistant Candida albicans
PublicationThe aim of the study was to compare the discriminatory power of RAPD-PCR method with using RSD10 primer and microsatellite analysis with using (GACA)4 primer for genotyping clinical isolates of fluconazole-resistant C. albicans. Isolates were received from patients of Children's Memorial Health Institute in Warsaw. However in the case of both tested methods low number of amplified fragments was generated, nine and six different...
-
Identyfikacja 20 nowych rejonów zmiennych w genomach Staphylococcus aureus przydatnych do genotypowania koagulazo-dodatnich gronkowców
PublicationW pracy zidentyfikowano 20 nowych rejonów zmiennych w genomach gronkowca złocistego przydatnych do badań epidemiologicznych metodą PCR. Teoretyczna analiza 35 genomów metodą PCR z udziałem 20 nowych regionów zmiennych pozwoliła na uzyskanie większej liczby genotypów w porównaniu do dwóch metod referencyjnych: REA-PFGE z udziałem endonukleazy SmaI oraz metody MLVA z udziałem 16 rejonów zmiennych.
-
Identification of anisakid nematodes from the Southern Baltic Sea usingPCR-based methods
PublicationZaproponowano metodę identyfikacji nicieni gatunków Anisakis, Hysterothyla-cium, Contracaecum przy użyciu techniki PCR/RFLP.
-
Comparative studies of the Acinetobacter genus and the species identification method based on the recA sequences
PublicationZaproponowano metodę genotypowania bakterii rodzaju Acinetobacter, opartą o analizę sekwencji genów recA, amplifikację fragmentów genu recA i analizę profili fragmentów restrykcyjnych po cięciu produktów reakcji PCR enzymami restrykcyjnymi (recA PCR/RFLP). Profile RFLP otrzymane za pomocą enzymu Tsp509I są użyteczne w identyfikacji poszczególnych gatunków bakterii rodzaju Acinetobacter. Na podstawie analizy otrzymanych sekwencji...
-
Clinical studies of detecting COVID-19 from exhaled breath with electronic nose
PublicationThe COVID‑19 pandemic has attracted numerous research studies because of its impact on society and the economy. The pandemic has led to progress in the development of diagnostic methods, utilizing the polymerase chain reaction (PCR) as the gold standard for coronavirus SARS‑CoV‑2 detection. Numerous tests can be used at home within 15 min or so but of with lower accuracy than PCR. There is still a need for point‑of‑care tests available...
-
Molecular identification and genotyping of Staphylococci: genus, species, strains, colnes, lineages, and interspecies exchanges
PublicationStaphylococci are increasingly recognized as etiological agents of many opportunistic human and animal infections, emphasizing the need for a rapid and accurate identification, even to a genotypical level of these bacteria. In the recent years, there has been a significant progress in typing and phylogenetic study of Staphylococcus species. Here, we describe molecular methods used in taxonomy as well as staphylococci characterization....
-
Expression of cyclin D1 after treatment with doxorubicin in the HL-60 cell line
PublicationIncreased levels of cyclin D1 and amplification of CCND1 gene occur in many types of cancers. We have followed the expression of cyclin D1 after treatment with doxorubicin with reference to cell death and other possible therapeutic implications. The effect of the treatment on the cell cycle, survival, intracellular level (flow cytometry), and intracellular localization of cyclin D1 (fluorescence microscopy) and expression of...
-
Taq DNA polymerase fused with DNA binding protein with increased resistance to inhibitors from clinical samples
PublicationNowadays PCR method is commonly used in molecular diagnostic. However, in many cases PCR is limited, by the presence of inhibitory substances in biological, soil or food samples Efficiency and fidelity of amplification is strongly connected with DNA polymerase and reaction conditions. To meet the requirements of modern diagnostic methods it is essential to seeking for new DNA polymerases with better properties useful in these field....
-
Emerging linezolid-resistant, vancomycin resistant Enterococcus faecium from a patient of a haematological unit in Poland.
PublicationOksazolidynowy antybiotyk, linezolid, jest stosowany w terapii infekcji powodowanych przez różne Gram-dodatnie bakterie, włączając w to vankomycyno-oporne enterokoki (VRE). Praca pokazuje po raz pierwszy w Polsce izolację szczepu Enterococcus faecium (LRVREF)opornego na linezolid oraz vankomycynę. Stosując techniki PCR-RFLP regionu rDNA i allelo specyficzny PCR domeny V regionu 23S rDNA wykazano obecność mutacji G2576U, identyfikowanej...
-
cDNA fingerprint from the hepatopancreatic glands of pond snails (Lymnaea stagnalis) exposed to benzo[a]pyrene
PublicationIdentification of differentially expressed genes that could be potentially used as biomarkers of PAH exposure of common invertebrate animal (like freshwater snail) would be a valuable resource for investigators interested in toxicology and biomonitoring of aquatic environments. Therefore, the aim of this research was to investigate effects of waterborne benzo[a]pyrene (B[a]P) exposure on mRNA expression in the pond snail’s (Lymnaea...
-
Konstrukcja nowych układów do diagnostyki molekularnej zakażeń o etiologii Candida spp.
PublicationDrożdżaki z rodzaju Candida należą do jednych z najczęściej izolowanych czynników etiologicznych zakażeń krwi. Szybka i bezbłędna identyfikacja gatunkowa pozwala na wdrożenie odpowiedniego leczenia i zwiększa szansę na powodzenie terapii. Celem badań była konstrukcja nowych układów wykorzystujących narzędzia diagnostyki molekularnej do specyficznej identyfikacji gatunkowej i rodzajowej drożdżaków Candida. Poszukiwano również nowych...
-
Techniki biologii molekularnej w analityce produktów mięsnych
PublicationW pracy przedstawiono możliwości wykorzystania reakcji PCR (Polymerase Chain Reaction) do identyfikacji patogennych drobnoustrojów a także do badania składu surowcowego w mięsnych produktach żywnościowych.
-
Versatile method employing basic techniques of genetic engineering to study the ability of low molecular weight compounds to bind covalently with DNA in cell free systems.
PublicationMechanizm działania większości leków przeciwnowotworowych oraz związków rakotwórczych polega na ich kowalencyjnym wiązaniu z DNA. Poziom tego wiązania jest zazwyczaj bardzo niski, co powoduje, że potrzebne są niezwykle czułe metody aby kowalencyjna modyfikacja mogła być w ogóle wykryta. My podjęliśmy próbę zastosowania w tym celu prostych, szybkich i sprawdzonych technik inżynierii genetycznej: metody PCR do uzyskania fragmentu...
-
5-Bromo-2′-deoxycytidine—a potential DNA photosensitizer
PublicationA double-stranded oligonucleotide, 80 base pairs in length, was multiply labeled with 5-bromo-2′-deoxycytidine (BrdC) using polymerase chain reaction (PCR). The modified oligonucleotide was irradiated with 300 nm photons and its damage was assayed by employing DHPLC, LC-MS and denaturing polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Two types of damage were demonstrated, namely, single strand breaks (SSBs) and intrastrand cross-links...
-
Fatal sepsis in a pregnant woman with pyelonephritis caused by Escherichia coli bearing Dr and P adhesins: diagnosis based on postmortem strain genotyping
PublicationW pracy został opisany pierwszy śmiertelny przypadek młodej kobiety w ciąży z powodu przewlekłego zapalenia odmiedniczkowego nerek spowodowany przez szczepy E. coli z fimbriami typu Dr + i P. Badania pośmiertne wykazały, że śmierć nastąpiła z powodu posocznicy do której doszło na skutek zakażenia szczepami E. coli Dr + . Odmiedniczkowe zapalenie nerek w ciąży jest związane z wieloma powikłaniami, w tym ograniczeniem wzrostu płodu,...
-
Rapid Assays for Specific Detection of Fungi of Scopulariopsis and Microascus Genera and Scopulariopsis brevicaulis Species
PublicationPurpose Fungi of Scopulariopsis and Microascus genera cause a wide range of infections, with S. brevicaulis being the most prevalent aetiological agent of mould onychomycosis. Proper identification of these pathogens requires sporulating culture, which considerably delays the diagnosis. So far, sequencing of rDNA regions of clinical isolates has produced ambiguous results due to the lack of reference sequences in publicly available...