Filters
total: 777
-
Catalog
Search results for: INHIBICJA ENZYMÓW
-
Beta-Galactosidases of Pseudoalteromonas sp. – Characteristics and application for lactose hydrolysis and galactopyranosides synthesis
PublicationBeta-galactosidase [EC 3.2.1.23] is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of O-glycosidic linkages in galactosides. It has biotechnological applications in the dairy industry for the production of milk with a low content of lactose and galactooligosacharides for use in healthy food. The transgalactosylation activity of beta-galactosidase can be used in the synthesis of alkyl galactopyranosides. Due to the fact that conditions of...
-
Autofagia: mechanizm molekularny, apoptoza i nowotwory = Autophagy: molecular mechanism, apoptosis and cancer
PublicationW pracy omówiono molekularny mechanizm autofagii oraz najważniejsze szlaki sygnałowe uczestniczące w regulacji przebiegu tego procesu w komórkach nowotworowych. Omówiona została również dwojaka rola autofagii w procesie nowotworzenia oraz skutki zarówno indukcji, jak i inhibicji autofagii w terapii przeciwnowotworowej
-
Hybrid biobattery based on arylated carbon nanotubes and laccase
PublicationJednościenne nanorurki węglowe modyfikowano resztami antracenu i antrachinonu Otrzymany materiał posłużył do modyfikacji elektrody węglowej w celu jej zastosowania do redukcji tlenu w bioogniwie paliwowym. Nanorurki z aromatycznymi grupami zwiększyły powierzchnię elektrody oraz przyczyniły się do zwiększenia bezpośredniego przeniesienia elektronów. Grupy arylowe mogą wnikać do hydrofobowej kieszeni enzymu, w której znajduje się...
-
The effect of cabbage juices on the activity and expression of GST isozymes in HepG2 cells
PublicationWcześniejsze badania pokazały zdolność soków z kapusty białej do indukowania aktywności enzymów detoksykacyjnych. Prezentowane wyniki potwierdziły zdolność fitokompleksu kapusty do stymulacji aktywności enzymów z grupy GST w komórkach HepG2 - modelu ludzkiej wątroby - w szczególności izoenzymów GST-alfa i GST-mi.
-
porównanie sinigriny i glukotrapeoliny jako substratów podczas oznaczania aktywności enzymatycznej mirozynazy
PublicationMirozynaza jest ważnym enzymem dla przebiegu procesu biofumigacji. Dzięki opracowaniu metodyki oznaczania aktywności tego enzymu, możliwe będą dalsze badania nad optymalizacją procesu hydrolizy glukozynolanów do izotiocyjnianów, które są związkami o największym znaczeniu w nauralnej ochronie roślin. W badaniach zastosowano dwie metody oznaczania aktywności enzymatycznej mirozynazy - metodę spektrofotometryczną i pH-statyczną, oraz...
-
The Development of Toxoplasma gondii Recombinant Trivalent Chimeric Proteins as an Alternative to Toxoplasma Lysate Antigen (TLA) in Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Detection of Immunoglobulin G (IgG) in Small Ruminants
Publication -
Ageing-Time Dependent Changes of Angiotensin I-Converting Enzyme-Inhibiting Activity of Protein Hydrolysates Obtained from Dry-Cured Pork Loins Inoculated with Probiotic Lactic Acid Bacteria
Publication -
The Development of Toxoplasma gondii Recombinant Trivalent Chimeric Proteins as an Alternative to Toxoplasma Lysate Antigen (TLA) in Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Detection of Immunoglobulin G (IgG) in Small Ruminants
PublicationThis study presents an evaluation of seventeen newly produced recombinant trivalent chimeric proteins (containing the same immunodominant fragment of SAG1 and SAG2 of Toxoplasma gondii antigens, and an additional immunodominant fragment of one of the parasite antigens, such as AMA1, GRA1, GRA2, GRA5, GRA6, GRA7, GRA9, LDH2, MAG1, MIC1, MIC3, P35, and ROP1) as a potential alternative to the whole-cell tachyzoite lysate (TLA) used...
-
Ryszard Andruszkiewicz prof. dr hab. inż.
People -
Expression of a GDSL esterase from Pseudomonas sp. S9 in Pichiapastoris
PublicationCold active lipolytic enzymes are promising to replace the conventional enzymes processes of biotechnological industries. One of the most important feature of the cold-active lipases and esterases is that they offer economic benefits through energy saving. In general, they exhibit high activity at low temperatures and low thermostability at moderate temperatures. Lipolytic enzyme EstS9 was isolated from Pseudomonas sp. S9. A multiple...
-
Esteraza GDSL z psychrotolerancyjnego szczepu Pseudomonas sp. S9 - konstrukcja systemów ekspresyjnych opartych o komórki Escherichia coli i Pichia pastoris, produkcja, oczyszczanie i charakterystyka uzyskanych białek rekombinowanych
PublicationW rozprawie doktorskiej celu opracowania wydajnej metody produkcji rekombinantowych wariantów sekwencyjnych enzymu esterolitycznego z psychrotolerancyjnego szczepu Pseudomonas sp. S9 zaprojektowano układy ekspresyjne umożliwiające ich produkcję w bakteriach Escherichia coli oraz drożdżach Pichia pastoris. W systemie ekspresyjnym E. coli wyprodukowano dwa warianty białek: EstS9Auto (białko zbudowane z domeny katalitycznej, domeny...
-
Cloning, expression, and biochemical characterization of a coldactive GDSL-esterase of a Pseudomonas sp. S9 isolated from Spitsbergen island soil
PublicationAn estS9 gene, encoding an esterase of the psychrotolerant bacterium Pseudomonas sp. S9 was cloned and sequenced. The deduced sequence revealed a protein of 636 amino acid residues with a molecular mass of 69 kDa.Further amino acid sequence analysis revealed that the EstS9 enzyme contained a G-D-S-L motif centered at a catalytic serine, an N-terminal catalytic domain and a C-terminal autotransporter domain. Two recombinant E. coli...
-
A new Thermus sp. class-IIS enzyme subfamily: isolation of a ''twin'' endo nuclease TspDTI with a novel specificity 5´-ATGAA(N11/9)-3´, related to TspGWI, Taqll and Tth111II. 5´-ATGAA(N11/9)-3´, spokrewnionej z TspGWI, TaqII i Tth111II.
PublicationOdkryto i scharakteryzowano nową subrodzinę enzymów klasy IIS z Thermus sp.
-
Antarctic marine bacterium Pseudoalteromonas sp. 22b as a source of cold adapted á-galaktosidase.
PublicationAntarktyczny morski szczep Pseudoalteromonas sp. 22b. jest źródłem wewnątrzkomórkowej beta-galaktozy. Enzym ten wykazuje wysoką aktywność hydrolizy laktozy w zakresie temperatur od 0 do 20 st. C oraz pH 6,0-8,0. W niniejszej pracy opisano metodykę uzyskania homogennego preparatu tego enzymu, oraz pełną charakterystykę jego własności enzymatycznych i kinetycznych.
-
Enzymatic cross-linking of β-lactoglobulin in solution and at air–water interface: Structural constraints
PublicationEffective and controlled use of cross-linking enzymes in structure engineering of food systems depends on characterization of the favorable conditions for enzyme-substrate complex and the limiting factors for the desired modification. In this respect, we analyzed the susceptibility of bovine β-lactoglobulin (BLG) to enzymatic cross-linking by Trichoderma reesei tyrosinase (TrTyr) and transglutaminase (TG). Changes in BLG molecular...
-
Disruption of homocitrate synthase genes in Candida albicans affects growth but not virulence
PublicationDwa geny, LYS21 i LYS22, kodujące izoformy syntazy homocytrynianowej, enzymu katalizującego pierwszy wyjątkowy etap w szlaku biosyntezy lizyny, zostały rozbite z komórkach Candida albicans z wykorzystaniem strategii ''SAT flipper''. Podwójny mutant lys21delta/lys22delta nie wykazywał aktywności syntazy homocytrynianowej, natomiast charakteryzował się auksotrofią wzrostową wobec lizyny w podłożach minimalnych, co można było odwrócić...
-
Characterization of two aminotransferases from Candida albicans
PublicationAminoadipate aminotransferase (AmAA) is an enzyme of α-aminoadipate pathway (AAP) for l-lysine biosynthesis. AmAA may also participated in biosynthesis or degradation of aromatic amino acids and in d-tryptophan based pigment production. The AAP is unique for fungal microorganisms. Enzymes involved in this pathway have specific structures and properties. These features can be used as potential molecular markers. Enzymes catalyzing...
-
Optimised five-hour multiplex PCR test for the detection of Tinea ungium: performance in a routine PCR laboratory
PublicationWe recently published the development of a 5-hour multiplex PCR test for the detection of dermatophyte nail infection. We have optimized this test by inclusion of an inhibition control and evaluated the test in a routine laboratory when compared to the conventional microscopy and culture. A total of 109 clinical samples received at the mycology reference lab at Statens Serum Institute were included. The samples were divided equally...
-
Toward better understanding of phosphoryl transfer reaction: the use of phosphoroorganic biocides in research studies
PublicationZamierzeniem autora było nakreślenie potencjalnych kierunków rozwoju badań z wykorzystaniem biocydów fosforoorganicznych (BFO) i związanej z nimi reakcji przeniesienia grupy fosforylowej (reakcja FT). Projektowane są nowe, wysoce selektywne inhibitory enzymów, które w pełni wyjaśniają rolę enzymów w warunkach normalnego funkcjonowania i w procesach patologicznych. Pozwoli to w konsekwencji na wyselekcjonowanie nowych terapeutyków...
-
In vitro enzyme kinetics and NMR-based product elucidation for glutathione S-conjugation of the anticancer unsymmetrical bisacridine C-2028 in liver microsomes and cytosol: major role of glutathione S-transferase M1-1 isoenzyme
PublicationThis work is the next step in studying the interplay between C-2028 (anticancer-active unsymmetrical bisacridine developed in our group) and the glutathione S-transferase/glutathione (GST/GSH) system. Here, we analyzed the concentration- and pH-dependent GSH conjugation of C-2028 in rat liver microsomes and cytosol. We also applied three recombinant human GST isoenzymes, which altered expression was found in various tumors. The...
-
Molecular modelling of transition state analogue inhibitors of glucosamine-6-P synthase and glucose-6-P isomerase.
PublicationStruktura kompleksu 2-amino-2-deoksy-D-glucitolo-6-P (ADGP) z centrum aktywnym syntazy GlcN-6-P z E. coli została wykorzystAna jako punkt wyjścia do modelowania molekularnego analogów ADGP. Używając programu GROMOS96 wygenerowano konformacje analogów o najniższych energiach wewnętrznych, które następnie ''dokowano'' w centrum aktywnym enzymu. Dokonano syntezy wybranych związków i określono parametry kinetyczne i termodynamiczne...
-
INFOGEST inter-laboratory recommendations for assaying gastric and pancreatic lipases activities prior to in vitro digestion studies
PublicationIn vitro digestion studies often use animal digestive enzyme extracts as substitutes of human gastric and pancreatic secretions. Pancreatin from porcine origin is thus commonly used to provide relevant pancreatic enzymes such as proteases, amylase and lipase. Rabbit gastric extracts (RGE) have been recently introduced to provide gastric lipase in addition to pepsin. Before preparing simulated gastric and pancreatic extracts with...
-
Synthesis and biological evaluation of thiophosphate tricyclic coumarin derivatives as steroid sulfatase inhibitors
PublicationSteroid sulfatase (STS) enzyme inhibition is an important approach to the management of hormone-dependent breast cancer. In this paper, we report convenient methods for the synthesis and biological evaluation of thiophosphate tricyclic coumarin analogs exhibiting STS activity. The described methods are based on the straightforward preparation of 7-hydroxy-2,3-dihydro-1H-cyclopenta[c]chromen-2-one, 3-hydroxy- 7,8,9,10-tetrahydro-6H-benzo[c]chromen-6-one,...
-
Konstrukcja nowych układów do diagnostyki molekularnej zakażeń o etiologii Candida spp.
PublicationDrożdżaki z rodzaju Candida należą do jednych z najczęściej izolowanych czynników etiologicznych zakażeń krwi. Szybka i bezbłędna identyfikacja gatunkowa pozwala na wdrożenie odpowiedniego leczenia i zwiększa szansę na powodzenie terapii. Celem badań była konstrukcja nowych układów wykorzystujących narzędzia diagnostyki molekularnej do specyficznej identyfikacji gatunkowej i rodzajowej drożdżaków Candida. Poszukiwano również nowych...
-
3D polypyrrole structures as a sensing material for glucose detection
PublicationIn this work, 3D polypyrrole (PPy) structures as material for glucose detection is proposed. Polypyrrole was electrochemically polymerized on platinum screen-printed electrode from an aqueous solution of lithium perchlorate and pyrrole. The growth mechanism of such PPy structures was studied by ex-situ scanning electron microscopy. Preliminary studies show that studied here PPy film is a good candidate as a sensing material for...
-
Effect of antitumor compounds on the yeast topoisomerase II relaxation activity
Open Research DataThe datasets contain results of antitumor compounds* (known inhibitors of human topoisomerase alpha II) inhibitory activity against yeast topoisomerase II. DNA topoisomerases (Topo) are enzymes that catalyze changes in the spatial structure of DNA and play an important role in replication, transcription and recombination. Beyond their normal functions,...
-
Investigation of biological and photochemical treatment of municipal landfill leachates
PublicationW pracy przedstawiono rezultaty badań charakterystyki oraz efektywności foto- oraz biodegradacji odcieków z dwóch składowisk komunalnych w północnej Polsce. Celem pracy było zbadanie efektywności oczyszczania w systemie UV, UV/H2O2 oraz możliwości biologicznego oczyszczania odcieków metodą osadu czynnego. Stosowanie metody kombinowanej (UV/H2O2/osad czynny) pozwoliło na uzyskanie lepszej efektywności oczyszczania (98% spadek wartości...
-
The effect of cabbage juice and it's active components on the protein level and expression of CYP19 in MCF-7 breast cancer cells
PublicationWiadomo, że bioaktywne skladniki kapusty mają chemoprewencyjne działanie w przypadku nowotworów piersi, między innymi ze względu na hamowanie aktywności enzymu aromatazy uczestniczącego w biosyntezie estrogenów. Badania prowadzono przy użyciu komórek raka piersi i stwierdzono, że soki z kapusty, zarówno pochodzącej z uprawy ekologicznej jak i przemysłowej, znacząco hamowały ekspresję genu CYP19 kodującego wspomniany enzym. Sugeruje...
-
Systemy ekspresyjne białek cytochromu P450 w badaniach in vitro metabolizmu leków = Expression systems of cytochrome P450 proteins in studies of drug metabolism in vitro
PublicationBiałka cytochromu P450 to najważniejsze enzymy biorące udział w metabolizmie większości stosowanych w klinice leków, odpowiedzialne za ich aktywację lub detoksykację. Niektóre z dróg metabolizmu leku mogą być jednak odpowiedzialne za jego podwyższoną toksyczność. Nowe systemy ekspresyjne białek cytochromu P450 w komórkach ssaków, w tym człowieka, projektowane są w celu poznania roli metabolizmu w mechanizmie działania potencjalnych,...
-
Prediction of Bioactive Peptides From Chicken Feather and Pig Hair Keratins Using In Silico Analysis Based on Fragmentomic Approach
PublicationBackground: Keratin is among the most abundant structural proteins of animal origin, however it remains broadly underutilized. Objective: Bioinformatic investigation was performed to evaluate selected keratins originating from mass-produced waste products, i.e., chicken feathers and pig hair, as potential sources of bioactive peptides. Methods: Pepsin, trypsin, chymotrypsin, papain, and subtilisin were used for in silico keratinolysis...
-
A standardised static in vitro digestion method suitable for food – an international consensus
PublicationSimulated gastro-intestinal digestion is widely employed in many fields of food and nutritional sciences, as conducting human trials are often costly, resource intensive, and ethically disputable. As a consequence, in vitro alternatives that determine endpoints such as the bioaccessibility of nutrients and non-nutrients or the digestibility of macronutrients (e.g. lipids, proteins and carbohydrates) are used for screening and building...
-
Thermostable beta-glucosidase with a broad substrate specifity suitable for processing of lactose-containing products.
PublicationHipertermofilny archeon Sulfolobus shibatae wytwarza termostabilną beta glukozydazę przydatną do hydrolizy laktozy w mleku i serwatce przejawiającą największą aktywność w 85 stC przy pH 5,5. Aktywność ekstraktu bezkomórkowego Sulfolobus shibatae wynosi 0.29 U/mg białka i może być 17-krotnie zwiększona poprzez frakcjonowanie siarczanem amonu, chromatografię jonowymienną i filtrację żelową. Badany enzym ma dużą termostabilność i...
-
Hydrophobic derivatives of 2-amino-2-deoxy-D-glucitol-6-phosphate: a newtype of D-glucosamine-6-phosphate synthase inhibitors with antifungal action.
PublicationDokonano syntezy szeregu N-acylowych i estrowych pochodnych 2-amino-2-deok-sy-glucitolo-6-fosforanu (ADGP) i zbadano ich aktywność przeciwgrzybową oraz wobec enzymów zaangażowanych we wczesne etapy biosyntezy chityny w komórkach grzybów. Wszystkie badane pochodne okazały się słabszymi inhibitorami enzymu syntezy GlcN-6-P aniżeli ADGP, ale niektóre z nich wykazywały znacznie wyższą aktywność przeciwgrzybową niż związek macierzysty....
-
Changes in mussel Mytilus galloprovincialis protein profile as a reaction of water pollution
PublicationW pracy przedstawiono zmiany w profilu białkowym małża Mytilus galloprovincialis jako odpowiedź na zanieczyszczenia wody. Określono pojemność przeciwutleniającą z wykorzystaniem testu TEAC. Stwierdzono różnice w poziomie inhibicji w białku pochodzącym od małży zebranych z regionów zanieczyszczonych w stosunku do małży pochodzących z regionów czystych.Zawartość cynku i kadmu w białkach małży pochodzących z regionów zanieczyszczonych...
-
Green chemical and hybrid enzymatic pretreatments for lignocellulosic biorefineries: Mechanism and challenges
PublicationThe greener chemical and enzymatic pretreatments for lignocellulosic biomasses are portraying a crucial role owing to their recalcitrant nature. Traditional pretreatments lead to partial degradation of lignin and hemicellulose moieties from the pretreated biomass. But it still restricts the enzyme accessibility for the digestibility towards the celluloses and the interaction of lignin-enzymes, nonproductively. Moreover, incursion...
-
Proteases immobilized on nanomaterials for biocatalytic, environmental and biomedical applications: Advantages and drawbacks
PublicationProteases have gained significant scientific and industrial interest due to their unique biocatalytic characteristics and broad-spectrum applications in different industries. The development of robust nanobiocatalytic systems by attaching proteases onto various nanostructured materials as fascinating and novel nanocarriers has demonstrated exceptional biocatalytic performance, substantial stability, and ease of recyclability over...
-
Novel application of terminal restriction fragments length polymorphism method (t-RFLP) for identification of six clinically important Candida sp.
PublicationTerminal restriction fragments length polymorphism method (t-RFLP) is a modified classical RFLP method. The main difference is based on carrying out PCR using a fluorescently labeled primer or primers. The result of such modification is that after digestion of amplicons only terminal fragments of PCR product (containing fluorescent dye) are visualized. T-RFLP method has found application in environmental microbiology and epidemiology....
-
Human CYP2 family of cytochrome P-450 takes part in metabolism of two acridine antitumor agents, C-1311 and C-1748, selected for I phase of clinical trials
PublicationPraca zawiera wyniki badań metabolicznej transformacji przeciwnowotworowych pochodnych akrydyny wobec zestawu 16 prób enzymów mikrosomalnych, pochodzących z wątroby 16 różnych pacjentów. Wykazano, że za metabolizm tych związków u człowieka odpowiedzialne są głównie izoenzymy z rodziny CYP2.
-
Glukuronidacja leków przeciwnowotworowych – detoksyfikacja, mechanizm oporności czy sposób na formę proleku?*
PublicationKsenobiotyki podlegają w organizmie biotransformacji I i II fazy, której celem jest ich detoksyfikacja i ułatwienie wydalania. UDP-glukuronylotransferazy (UGT) – enzymy należące do II fazy metabolizmu katalizują przyłączenie kwasu glukuronowego do lipofilowego substratu zawierającego nukleofilową grupę funkcyjną. Nadrodzina UGT składa się z izoenzymów o różnej swoistości substratowej oraz odmiennym profilu ekspresji w poszczególnych tkankach....
-
Właściwości i zastosowanie termostabilnych proteaz
PublicationProteazy stanowią największą grupę enzymów spośród dostępnych i wykorzystywanych przemysłowo biokatalizatorów. Wynika to z ważnej roli jaką odgrywają w wielu procesach technologicznych. Obecnie na rynku dostępnych jest wiele preparatów przeznaczonych głównie dla przemysłu żywnościowego, farmaceutycznego, tekstylnego,garbarniczego czy produkcji detergentów.
-
Food components and their role in food quality
PublicationBiałka, lipidy, sacharydy, składniki mineralne, woda i inne składniki wpły-wają na właściwości sensoryczne, trwałość, wartość odżywczą i zdrowotnośćżywności. W czasie przechowywania żywności i wskutek obróbki składniki ule-gają korzystnym i niepożądanym zmianom pod wpływem działania enzymów i czyn-ników środowiska.
-
Modulation of mRNA and protein levels of CYP1A1, 1A2, and 1B1 in nontumorigenic breast epithelial cells (MCF10A) by cabbage juice and its active components
PublicationZbadano wpływ soków z kapusty oraz występujących w nich pochodnych indolowych i sulforafanu na poziom ekspresji enzymów odpowiedzialnych za metabolizm ksenobiotyków w tym estrogenów. Wykazano, że soki z kapusty i izolowane substancje mają podobny wpływ na poziom mRNA i białek enzymatycznych.
-
Interstrand crosslinking of DNA by C-1311 (Symadex) and other imidazoacridinones
PublicationImidazoakrydony, w tym pochodna C-1311 (Symadex) znajdująca się w pierwszej fazie badań klinicznych prowadzonych w USA, należą do grupy bardzo aktywnych związków przeciwnowotworowych zsyntetyzowanych w Katedrze Technologii Leków i Biochemii PG. Za pomocą zmodyfikowanej metody Parsons'a wykazaliśmy, że C-1311 indukuje, w sposób zależny od stężenia, międzyłańcuchowe wiązania sieciujące w komórkach różnych nowotworów ludzkiego pochodzenia...
-
Józef Kur prof. dr hab.
People -
Antifungal Effect of Penicillamine Due to the Selective Targeting of L-Homoserine O-Acetyltransferase
PublicationDue to the apparent similarity of fungal and mammalian metabolic pathways, the number of established antifungal targets is low, and the identification of novel ones is highly desirable. The results of our studies, presented in this work, indicate that the fungal biosynthetic pathway of L-methionine, an amino acid essential for humans, seems to be an attractive perspective. The MET2 gene from Candida albicans encoding L-homoserine...
-
Plasmids pMET2M1 and pMET15M1 with the SAT1 Flipper knockout cassette construction
Open Research DataThe goal of the study was to obtain plasmids containing the SAT1 Flipper knockout cassette along with upstream and downstream gene fragments (MET2, MET15) and to introduce a cleavage site for restriction enzymes into them.
-
The cellular response of human hepatoma cells with different expression of CYP3A4 isoenzyme to treatment with triazoloacridinone derivative C-1305
PublicationCelem badań było określenie w jaki sposób ekspresja enzymów odpowiedzialnych za metabolizm pochodnej triazoloakrydonu C-1305 wpływa na odpowiedź komórek ludzkiego raka wątroby HepG2 i Hep3A4. W komórkach HepG2 triazoloakrydon C-1305 indukuje proces starzenia, podczas gdy w przypadku linii Hep3A4, komórki ulegają apoptozie oraz nekrozie.
-
Beta-galactosidases from a psychrotolerant Arthrobacter isolates and their potential use
PublicationEnzymes from extremophiles, especially psychrophiles and psychrotolerant microorganisms are currently intensively studied because of their unusual structural and functional properties. One of these enzymes is a cold-adapted - galactosidase (EC 3.2.1.23) which catalyzes the hydrolysis of - 1,4-glycosidic bonds in -galactosides. The most common - galactoside is lactose, a disaccharide which makes up 2-7% of milk. The majority of...
-
Sposób unieruchomienia enzymów
Inventions -
Inserts amplification for knockout cassette construction
Open Research DataThe goal of the study was to obtain optimal conditions for amplification of upstream and downstream genes fragments and introduce a cleavage site for restriction enzymes into them thanks to which it will be possible to clone fragments into a plasmid containing elements of the knockout cassette. The constructed cassettes will enable the removal of the...