Search results for: pcr
-
PCR-ELISA: inexpensive alternative to quantitative PCR
PublicationPCR-ELISA (polymerase chain reaction-enzyme linked immunosorbent assay), a combination of PCR and ELISA methods, has been used since late 1980s. The technique is based on specially labelled DNA fragments which are captured by specific DNA sequences and detected by antibodies. The whole procedure of PCR-ELISA is divided into three steps: DNA extraction, PCR reaction and detection by ELISA. The method has been found as very specific...
-
Specific detection of Alternaria alternata by PCR and real-time PCR
PublicationFungi of Alternaria genus are cosmopolitan organisms, which spores can be found in the air, soil, water, clothing and food. They commonly occur as saprotrophs on the plant remains, contributing to the decomposition of organic matter. Additionally, they are components of the normal human and animal skin flora. Alternaria spp. are also known human allergens, causing hay fever and allergic reactions that can lead to the development...
-
PCR and real-time PCR assays to detect fungi of Alternaria alternata species
PublicationFungi of the Alternaria genus are mostly associated with allergic diseases. However, with a growing number of immunocompromised patients, these fungi, with A. alternata being the most prevalent one, are increasingly recognized as etiological agents of infections (phaeohyphomycoses) in humans. Nowadays, identification of Alternaria spp. requires their pure culture and is solely based on morphological criteria. Clinically, Alternaria...
-
PCR melting profile (PCR MP) - a new tool for differentiation of Candida albicans strains
PublicationPo raz pierwszy przedstawiliśmy użyteczność techniki PCR MP opartej na metodzie ligacji adaptorów (LM PCR) i obniżonej temperaturze denaturacji w cyklach PCR do wewnątrzgatunkowego różnicowania szczepów Candida albicans. Przebadaliśmy 123 szczepy Candida albicans z zastosowaniem trzech metod genotypowania: PCR MP, REA-PFGE i RAPD i uzyskaliśmy odpowiednio 27, 26 i 25 unikalnych genotypów. Zaprezentowane dane pokazały, że technika...
-
Technika PCR MP (PCR Melting Profile) - możliwości zastosowania w badaniach epidemiologicznych
PublicationUżyteczność PCR MP (ang. PCR Melting Profile), stosunkowo nowej techniki różnicowania genetycznego szczepów mikroorganizmów, pokazano na przykładach badań epidemiologicznych, dotyczących wykrywania zakażeń szpitalnych, analizy sytuacji epidemiologicznej i identyfikacji transmisji bakteryjnej u poszczególnych pacjentów. Technikę PCR MP charakteryzuje prostota, niskie koszty wykonania oraz potencjał różnicujący porównywalny do metody...
-
PCR detection of Scopulariopsis brevicaulis
PublicationScopulariopsis brevicaulis is known as a most common etiological factor of the mould toenail infections. There are also reports indicating that S. brevicaulis could cause organ and disseminated infections. Nowadays microscopic observations from the direct sample and culture are crucial for the appropriate recognition of the infection. In this paper is presented a PCR-based method for S. brevicaulis detection. The specificity of...
-
A comparative evaluation of PCR ribotyping and ERIC PCR for determining the diversity of clinical Pseudomonas aeruginosa isolates
PublicationW pracy porównano dwie metody stosowane do badania różnorodności genetycznej drobnoustrojów. Modelem do badań była grupa 62 klinicznych izolatów bakterii P. aeruginosa. Zdecydowanie wyższy potencjał różnicujący stwierdzono w przypadku metody ERIC PCR, której zastosowanie pozwoliło na wyodrębnienie 36 różnych genotypów. W przypadku rybotypowania wyróżniono tylko 9 genotypów.
-
DDLMS PCR double digestion Ligation Mediated Suppression PCR - a new technique for bacterial specific differentiation
PublicationA new diagnostic kit for K. oxytoca specific differentiation based on ddLMS PCR (ang. double digest ligation Mediated PCR) technique is shown. As a species-specific DNA fragment pehX gene, encoding the enzyme polygalactouronase, was chosen. The genome sequence of K. oxytoca is digested with two endonucleases: AclI and BclI which cut DNA before and after pehX gene. The polymorphic DNA fragments are ligated with AclI-end-specific...
-
Optimized 5-hour multiplex PCR test for the detection of tinea unguium: performance in a routine PCR laboratory
PublicationWe recently reported the development of a 5-hour multiplex PCR test for the detection of tinea unguium and the optimization of this test by the inclusion of an inhibition control. Here we report the performance of this procedure as used in a routine clinical laboratory as compared to conventional microscopy and culture-based techniques performed in a mycology reference laboratory. We found in processing 109 samples that 22 (20.2%)...
-
Optimised five-hour multiplex PCR test for the detection of Tinea ungium: performance in a routine PCR laboratory
PublicationWe recently published the development of a 5-hour multiplex PCR test for the detection of dermatophyte nail infection. We have optimized this test by inclusion of an inhibition control and evaluated the test in a routine laboratory when compared to the conventional microscopy and culture. A total of 109 clinical samples received at the mycology reference lab at Statens Serum Institute were included. The samples were divided equally...
-
Modified DNA polymerases for PCR troubleshooting
PublicationPCR has become an essential tool in biological science. However, researchers often encounter problems with difficult targets, inhibitors accompanying the samples, or PCR trouble related to DNA polymerase. Therefore, PCR optimization is necessary to obtain better results. One solution is using modified DNA polymerases with desirable properties for the experiments. In this article, PCR troubleshooting, depending on the DNA polymerase...
-
PCR test for Microsporum canis identification
PublicationMicrosporum canis, for which the natural hosts are cats and dogs, is the most prevalent zoophilic agent causing tinea capitis and tinea corporis in humans. We present here a diagnostic PCR test for M. canis, since its detection and species identification is relevant to the choice of treatment and to the understanding of a probable source of infection. An M. canis-specific PCR was evaluated using 130 clinical isolates of dermatophytes...
-
The construction and use of a PCR internal control
Publication -
PCR and real-time PCR approaches to the identification of Arthroderma otae species Microsporum canis and Microsporum audouinii/Microsporum ferrugineum
PublicationObjectives The identification of species in the Arthroderma otae complex is essential to determine the origin of infection and to eliminate the risk of transmission. Microsporum canis is a zoophilic species, whereas Microsporum audouinii and Microsporum ferrugineum are anthropophilic species. In this paper, we propose alternative methods that permit species-specific identification of both anthropophilic and zoophilic members of...
-
Diagnostic PCR assay for Microsporum and Trichophyton infections
PublicationWe have previously described a highly sensitive 5-hour PCR test for the rapid diagnosis of onychomycosis which detects any dermatophyte and species-identify T. rubrum from patient specimens. We have subsequently developed and evaluated new PCR tests for detection of Trichophyton and Microsporum canis/audouinii infections.58 dermatophyte isolates (21) Microsporum spp. (4 different species), 35 Trichophyton spp (10 different species)...
-
Ligation Mediated PCR methods, their possibilities and limitations
PublicationThe application of molecular diagnostics for bacterial strain typing or identifying bacteria at the strain level is of particular importance at present. However, among the many genotyping methods that are currently available, no single one is universally ideal. In this article, we thus review the Ligation Mediated PCR group methods as prospects from which to choose. We discuss different strategies for selecting the amplified PCR...
-
The New LM-PCR/Shifter Method for the Genotyping of Microorganisms Based on the Use of a Class IIS Restriction Enzyme and Ligation Mediated PCR
PublicationThis study details and examines a novel Ligation-Mediated - Polymerase Chain Reaction (LM-PCR) method. Named the LM-PCR/Shifter, it relies on the use of a Class IIS restriction enzyme giving restriction fragments with different 4 base, 5' overhangs, this being the Shifter, and the ligation of appropriate oligonucleotide adapters. A sequence of 4-base, 5' overhangs of the adapter and a 4-base sequence of the 3' end of the primer(s)...
-
PRZYDATNOŚĆ DIAGNOSTYCZNA REAKCJI PCR W ROZPOZNAWANIU BORELIOZY
PublicationBorelioza jest wieloukładową chorobą wywoływaną przez bakterie zaliczane do kompleksu Borrelia burgdorferi sensu lato. Wektorem przenoszącym infekcję są kleszcze z rodzaju Ixodes, które zakażają kolejnych żywicieli krętka podczas spożywania ich krwi. Zróżnicowany przebieg boreliozy uniemożliwia jej rozpoznanie na podstawie objawów klinicznych. W związku z tym diagnostyka choroby z Lyme opiera się głównie na metodach laboratoryjnych,...
-
The New LM-PCR/Shifter Method for the Genotyping of Microorganism
PublicationTechniques relies on the ligation of appropriates adapters (LM-PCR) as AFLP, PCR MP and ADSRRS are successfully used for epidemiological studies for prokaryotic and eukaryotic microorganisms. In this study we propose a new method, called the LM-PCR/Shifter, based on the use of a Class IIS restriction enzyme giving restriction fragments with different 4 base 5' overhangs (Shifter) and the ligation of appropriate oligonucleotide...
-
Real-Time PCR: molecular technique of many applications
PublicationReal-Time PCR is a sensitive DNA amplification technique initially applied in genetics and molecular biology. It enables in vivo copying of the selected DNA fragment (flanked by two primers) by the thermostable polymerase (in the presence of magnesium ions and deoxynucleotide triphosphates) and simultaneous measurement of the fluorescence. For one or more specific sequences in a DNA sample, real-time PCR enables both detection...
-
Ewaluation of a PCR Melting Profile technique for bacterial strain differentiation
PublicationBadano przydatność techniki PCR MP w efektywnym typowaniu szczepów w badaniach epidemiologicznych zakażeń szpitalnych. Technika oparta jest na użyciu niskiej temperatury denaturacji podczas LM PCR. Badaniu zostały poddane izolaty Escherichia coli pochodzące od pacjentów Szpitala Klinicznego w Gdańsku. Wykazano, że technika jest szybka, o wysokim potencjale różnicującym i bardzo dobrej powtarzalności i może być zastosowana w badaniach...
-
Detection of sulfonamide resistance genes via in situ PCR-FISH
PublicationDue to the rising use of antibiotics and as a consequence of their concentration in the environment an increasing number of antibiotic resistant bacteria is observed. The phenomenon has a hazardous impact on human and animal life. Sulfamethoxazole is one of the sulfonamides commonly detected in surface waters and soil. The aim of the study was to detect sulfamethoxazole resistance genes in activated sludge biocenosis by use of...
-
Wykorzystanie reakcji PCR do badania charakterystycznych obszarów genomu
PublicationW pracy zostały opisane metody wykorzystujące technię PCR do długo- i krótkoterminowych badań epidemiologicznych. Typowanie szczepów oparte jest na analizie fragmentów genów, bądź całego genomu w zależności od potrzeby posiadania potencjału różnicującego metody. Przez ostatnie 30 lat rozwijały się nie tylko metody badawcze, doszło również do rozwoju międzynarodowych baz danych i przepływu informacji o obecnych sytuacjach epidemiologicznych...
-
Modyfikacje polimeraz DNA jako rozwiązania problemów w reakcjach PCR
PublicationReakcja PCR już od wielu lat jest podstawowym narzędziem stosowanym w biotechnologii molekularnej. Nadal napotykamy jednak liczne problemy podczas jej przeprowadzania związane z trudnymi matrycami, obecnością inhibitorów itp. Optymalizacja reakcji PCR jest więc niezbędna w celu poprawy wyników. Jednym z rozwiązań tych problemów może być modyfikowanie polimeraz DNA. W powyższym artykule opisano problemy i rozwiązania zależne polimerazy...
-
A simple modification of PCR thermal profile applied to evade persisting contamination
PublicationThe polymerase chain reaction (PCR), one of the most commonly applied methods of diagnostics and molecular biology has a frustrating downside known as the false positive signal or contamination. Several solutions to avoid and to eliminate PCR contaminations have been worked out to date but the implementation of these solutions to laboratory practice may be laborious and time consuming. A simple approach to circumvent the problem...
-
Diagnostic PCR tests for Microsporum audouinii, M. canis and Trichophyton infections
PublicationSince traditional diagnosis of dermatophyte infections is slow, we present a rapid new pcr test for detection of trichophyton spp., microsporum canis and m. audouinii infections. the performance of the test was evaluated with: 58 dermatophyte isolates; 10 yeast, mould and human dna control samples; 25 routine specimens from patients suspected of having dermatophytosis; 10 hair specimens from guinea pigs experimentally infected...
-
Real-time PCR approach in dermatophyte detection and Trichophyton rubrum identification
PublicationDermatophytes are keratinophilic molds that infect human hair, nails and skin. Diagnosis of dermatophytosis is based on morphological, serological and biochemical features. However, identification is difficult and laborious due to similarities between microorganisms. Thus, there is considerable interest to develop mycological diagnostic procedures based on molecular biology methods. In this study, fast, two-step DNA extraction...
-
Molecular typing of clinical isolates of Escherichia coli by a new PCR MP method
PublicationTypowanie epidemiologiczne bakterii jest rutynową procedurą stosowaną w badaniach zakażeń szpitalnych i wymaga stosowania odpowiednich metod o wysokim potencjale różnicującym. Przedstawiliśmy możliwości nowej techniki PCR MP w różnicowaniu szczepów E. coli. Rezultaty zostały porównane z wynikami uzyskanymi metodą PFGE.
-
Molecular typing of clinical isolates of Escherichia coli by a new PCR MP method
PublicationTypowanie epidemiologiczne bakterii jest rutynową procedurą stosowaną w badaniach zakażeń szpitalnych i wymaga stosowania odpowiednich metod o wysokim potencjale różnicującym. Przedstawiliśmy możliwości nowej techniki PCR MP w różnicowaniu szczepów E. coli. Rezultaty zostały porównane z wynikami uzyskanymi metodą PFGE.
-
Diagnostyka zakażeń Candida spp. oparta o amplifikację DNA techniką PCR
PublicationZakażenia wywoływane przez oportunistyczne grzyby z rodzaju Candida są poważnym problemem klinicznym. Niezbędne jest poszukiwanie nowych szybkich, czułych i pewnych metod do identyfikacji gatunkowej tych drobnoustrojów. W artykule przedstawiono opisane w literaturze metody diagnostyki molekularnej drożdżaków z rodzaju Candida oparte o amplifikację DNA techniką PCR.
-
BDNF Val66Met Polymorphism, the Allele-Specific Analysis by qRT-PCR - a Novel Protocol
Publication -
ADSRRS-fingerprinting and PCR MP techniques for studies of intraspecies genetic relatedness in Staphylococcus aureus
PublicationW pracy pokazano użyteczność dwóch nowych metod do typowania molekularnego Staphylococcus aureus, ADSRRS-fingerprinting (Amplification of DNA fragments Surrounding Rare Restriction Sites) i PCR MP (PCR melting profile). Przebadano 37 szczepów Staphylococcus aureus izolowanych od pacjentów z czyracznością. Jako metodę referencyjną zastosowano REA-PFGE. Okazało się, że izolaty Staphylococcus aureus z nosa od niektórych pacjentów...
-
Opracowanie zestawu diagnostycznego do genetycznego typowania szczepów bakteryjnych metodą PCR MP
PublicationOmówiono etapy tworzenia zestawu diagnostycznego przeznaczonego do genetycznego typowania szczepów bakteryjnych wykorzystującego procedurę PCR MP (PCR Melting Profiles). Dokonano optymalizacji warunków i walidacji metody w celu przystosowania jej do potrzeb epidemiologicznej oceny zakażeń szpitalnych. Opracowany zestaw stwarza możliwości zastosowania go w laboratoriach prowadzących rutynowo badania diagnostyczne.
-
Principles and applications of Ligation Mediated PCR methods for DNA-based typing of microbial organisms
PublicationA significant number of DNA-based techniques has been introduced into the field of microorganisms’ characterization and taxonomy. These genomic fingerprinting methods were developed to detect DNA sequence polymorphisms by using general principles, such as restriction endonuclease analysis, molecular hybridization, and PCR amplification. In recent years, some alternative techniques based on ligation of oligonucleotide adapters before...
-
PCR-RFLP assays for species-specific identification of fungi belonging to Scopulariopsis and related genera
PublicationFungi of the Scopulariopsis genus, commonly found in the environment, are opportunistic pathogens that can cause various types of human infections. So far, no efficient molecular method has been developed for species differentiation among Scopulariopsis and related genera. In order to advance this field, we have evaluated performance of polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) assays, based...
-
Identification of Leaf Rust Resistance Genes in Selected Wheat Cultivars and Development of Multiplex PCR
Publication -
Nested PCR for the detection of Aspergillus species in maxillary sinus samples of patients with chronic sinusitis
Publication -
Zakażenia bakteryjne w przewlekłym zapaleniu ucha środkowego - ocena przydatności diagnostyki molekularnej opartej o technikę PCR. Bacterial infection in chronic otitis media - assessment of usefulness of molecular diagnostic based in PCR method.
PublicationIdentyfikacja zakażeń w przewlekłym zapaleniu ucha środkowego jest trudna, o czym świadczą wysokie odsetki ujemnych wyników badań bakteriologicznych. Przyczyną tego jest trudność w uzyskiwaniu wiarygodnego materiału do badań oraz stosunkowo niska czułość klasycznych metod diagnostycznych. Amplifikacja bakteryjnego DNA techniką PCR jest badaniem, które może przyczynić się do zwiększenia efektywności i czułości badań bakteriologicznych....
-
New PCR test for detection of Candida glabrata based on the molecular target chosen by the RAPD technique
PublicationRapid, reliable diagnosis is a necessary condition for the successful treatment of infections. Such diagnostic assays are continually being developed. #e paper presents a method for selecting the molecular target for PCR-based diagnostics based on the comparison of RAPD patterns. A sequence encoding Candida glabrata CBS138 hypothetical protein was selected. The limit of detection for PCR and real-time PCR reactions with DNA extracted...
-
Usefulness of the PCR technique for bacterial DNA detection in blood of the patients after ''oppened heart'' operations.
PublicationOperacje kardiochirurgiczne w krążeniu pozaustrojowym (KPU) poprzez ogromny uraz, powodowanie występowania zaburzeń odporności oraz uszkodzenie barier anatomicznych stwarzają sytuację wybitnie sprzyjającą rozwojowi powikłań infekcyjnych u tych chorych. Prowadzenie terapii antybiotykowej profilaktycznej i leczniczej, a także selektywna dekontaminacja przewodu pokarmowego może utrudniać i przedłużać czas rozpoznania obecności bakterii...
-
Evaluation of possibilities of genotyping of Candida glabrata clinical isolates with RAPD-PCR method and microsatellite analysis
PublicationThe aim of the study was to compare the discriminatory power of RAPD-PCR method using RSD10 primer and microsatellite (GACA)4 analysis for genotyping clinical isolates of C. glabrata. Isolates were received from patients of two Polish hospitals: Children's Memorial Health Institute in Warsaw (n=17) and Medical University of Gdansk (n=37). Species identification was confirmed by two phenotypic methods: growth on chromagar plates...
-
Evaluation of a PCR Melting Profile method for intra-species differentiation of Trichophyton rubrum and Trichophyton interdigitale
PublicationW celu identyfikacji źródła infekcji spowodowanych przez dermatofity, jak i drogi ich transmisji, istnieje potrzeba szukania nowych metod, które pozwolą na głębokie zróżnicowanie genetyczne szczepów w obrębie rodzaju. W pracy po raz pierwszy pokazano zastosowanie techniki PCR MP opartej o adaptory oligonukleotydowe i różnice w temperaturze topnienia fragmentów restrykcyjnych DNA w reakcji PCR do wewnątrzgatunkowego typowania dermatofitów....
-
DNA Methylation Changes Induced by Redox-Active Compounds—Choosing the Right PCR-Based Method
PublicationThe impact of catechins on the expression profile of redox-related genes in HT29 cell line has been studied recently by our group using Oxidative Stress RT2 Profiler PCR Array. Within the examined panel of 84 genes, the down-regulation of SRXN1 gene was unique among other up-regulated genes. We hypothesized that the observed down-regulation resulted from DNA methylation and have exploited this observation to choose the proper strategy...
-
System do diagnostyki dermatofitowych zakażeń powierzchniowych oparty na technice Real-Time PCR
PublicationDermatofity należą do blisko spokrewnionej grupy grzybów, które wykazują wysokie powinowactwo do skeratynizowanych tkanek. Cecha ta czyni je odpowiedzialnymi za powierzchniowe grzybice skóry, paznokci oraz włosów. Szacuje się, iż nawet do 20% ludzi na całym świecie dotkniętych jest infekcjami powodowanymi przez dermatofity. Ich leczenie wymaga długotrwałego zastosowania leków przeciwgrzybiczych. W celu dobrania odpowiedniego leczenia...
-
The use of a one-step PCR method for the identification of Microsporum canis and Trichophyton mentagrophytes infection of pets
PublicationIntroduction: Dermatophytes are a closely related group of keratinophilic fungi. They encompass important etiological agents of superficial fungal infections. These fungi are able to invade keratinized tissues of humans and animals, causing dermatophytosis (ringworm) of hair, nails or skin. The aim: Traditional diagnostics of ringworm is based on morphological identification of cultured fungi and is time-consuming. Materials and methods:...
-
Application of PCR-HRM method for microsatellite polymorphism genotyping in the LDHA gene of pigeons (Columba livia)
Publication -
PCR amplification with primers based on IS2404 and GC-rich repeated sequence reveals polymorphism in Mycobacterium ulcerans
PublicationOpracowano prostą w wykonaniu metodę genotypowania szczepów bakterii z gatunku Mycobacterium ulcerans. Polimorfizm genetyczny 32 badanych izolatów Mycobacterium ulcerans odzwierciedla ich geograficzne pochodzenie z rejonów Afryki Centralnej, Ameryki Południowej i Łacińskiej, Azji Południowo-Wschodniej, Malezji oraz Australii.
-
Recombinant !ermostable AP Exonuclease from Thermoanaerobacter tengcongensis: Cloning, Expression, Purification, Properties and PCR Application
PublicationApurinic/apyrimidinic (AP) sites in DNA are considered to be highly mutagenic and must be corrected to preserve genetic integrity, especially at high temperatures. !e gene encoding a homologue of AP exonuclease was cloned from the thermophilic anaerobic bacterium Thermoanaerobacter tengcongensis and transformed into Escherichia coli. The protein product showed high identity (80%) to human Ape1 nuclease, whereas to E. coli exonuclease...
-
Species - specific detection of the toxic mushrooms Amanita virosa and Amanita verna by PCR amplification of the gpd gene fragment
PublicationZaprojektowano dwie pary starterów do reakcji PCR, które umożliwiają gatunkowo specyficzną amplifikację unikalnych fragmentów genów gpd dla dwóch grzybów kapeluszowych: muchomora wiosennego (Amanita verna) i muchomora jadowitego (Amanita virosa).
-
Application of SSB-like protein from Thermus aquaticus in multiplex PCR of human Y-STR markers identification
PublicationW tej publikacji prezentujemy zastosowanie białka SSB-podobnego Thermus aquaticus (TaqSSB) w reakcji multiplex PCR w celu identyfikacji markerów ludzkiego Y-STR. Wykorzystanie termostabilnego białka TaqSSB chroni lub redukuje tworzenie przez startery struktur dimerycznych, które powodują hamowanie hybrydyzacji starterów do badanego DNA i redukują ilość starterów dostępnych w reakcji PCR.
-
Highly thermostable RadA protein from the archaeon Pyrococcus woesei enhances specificity of simplex and multiplex PCR assays
Publication -
PCR Melting Profile method for genotyping analysis of vancomycin-resistant Enterococcus faecium isolates from Hematological Unit patients
PublicationW ostatnich latach znacząco wzrasta liczba szczepów Enterococcus opornych na wankomycynę. Stwarzają one problemy medyczne u pacjentów skolonizowanych czy zainfekowanych tymi drobnoustrojami. W przedstawionych badaniach, określiliśmy genetyczne podobieństwo pomiędzy izolatami E. faecium VRE, pozyskiwanymi w okresie od kwietnia 2003 do kwietnia 2005 od pojedynczych pacjentów oddziału Hematologicznego Specjalistycznego Publicznego...
-
PCR-Based Genotyping of Mycobacterium tuberculosis with New GC-Rich Repeated Sequences and IS6110 Inverted Repeats Used as Primers.
PublicationW pracy przedstawiono nową metodę genotypowania Mycobacterium tuberculosis. Zastosowanie oligonukleotydu Mtb1 5'-CCG-GCG-GGG-CCG-GCG-G lub Mtb2 5'-CGG-CGG-CAA-CGG-CGG-C wraz z oligonukleotydami specyficznymi do terminalnych sekwencji elementu insercyjnego IS6110 pozwala na różnicowanie szczepów Mycobacterium tuberculosis w metodzie PCR. Opracowana metoda może być wykorzystana w badaniach epidemiologicznych gruźlicy.
-
Fusion of DNA-binding domain of Pyrococcus furiosus ligase with TaqStoffel DNA polymerase as a useful tool in PCR with difficult targets
PublicationThe DNA coding sequence of TaqStoffel polymer- ase was fused with the DNA-binding domain of Pyrococcus furiosus ligase. The resulting novel recombinant gene was cloned and expressed in E. coli. The recombinant enzyme was purified and its enzymatic features were studied. The fusion protein (PfuDBDlig-TaqS) was found to have enhanced processivity as a result of the conversion of the Taq DNA polymerase from a relatively low processive...
-
Usefulness of PCR Melting Profile Method for Genotyping Analysis of Klebsiella oxytoca Isolates from Patients of a Single Hospital Unit
PublicationOpracowanie szybkich i prostych metod typowania jest wymagane w celu identyfikacji potencjalnych źródeł zakażenia ludzi drobnoustrojami oportunistycznymi. Klebsiella spp. należą do grupy bakterii oportunistycznych odpowiedzialnych za wzrost liczby wieloopornych zakażeń szpitalnych. Ostatnio pokazaliśmy wysoką różnorodność genetyczną K. oxytoca używając dużej kolekcji szczepów izolowanych przez 50 lat od pacjentów z kilku szpitali...
-
Identification of Powdery Mildew Blumeria graminis f. sp. tritici Resistance Genes in Selected Wheat Varieties and Development of Multiplex PCR
Publication -
Enterococci from ready-to-eat food - horizontal gene transfer of antibiotic resistance genes and genotypic characterization by PCR melting profile
Publication -
One-tube cell lysis and DNA extraction procedure for PCR based detection of Mycobacterium ulcerans in aquatic insects, molluscs and fish.
PublicationMycobacterium ulcerans jest bakterią wywołującą choroby skóry u ludzi i zwierząt. W trakcie prowadzonych badań opracowano prostą w wykonaniu metodę ekstrakcji DNA Mycobacterium ulcerans z próbek środowiskowych oraz klinicznych. Opracowana metoda izolacji DNA może być przydatna w badaniu źródeł infekcji oraz dróg szerzenia się Mycobacterium ulcerans.
-
A New Double Digestion Ligation Mediated Suppression PCR Method for Simultaneous Bacteria DNA-Typing and Confirmation of Species: An Acinetobacter sp. Model
PublicationWe have designed a new ddLMS PCR (double digestion Ligation Mediated Suppression PCR) method based on restriction site polymorphism upstream from the specific target sequence for the simultaneous identification and differentiation of bacterial strains. The ddLMS PCR combines a simple PCR used for species or genus identification and the LM PCR strategy for strain differentiation. The bacterial identification is confirmed in the...
-
Discovery and characterization of RecA protein of thermophilic bacterium Thermus thermophilus MAT72 phage Tt72 that increases specificity of a PCR-based DNA amplification
Publication -
Use of rapid immunochromatographic tests and PCR for the detection of vaccine viruses (CPV, CDV CAV) in faeces and conjunctival sac swabs of vaccinated dogs
Publication -
Różnicowanie C. albicans i C. dubliniensis w oparciu o polimorfizm genu syntazy homocytrynianowej z wykorzystaniem metody PCR RFLP
PublicationNajczęstszym czynnikiem etiologicznym zakażeń wywołanych przez drożdżaki z rodzaju Candida jest C. albicans. Gatunek ten posiada bardzo zbliżone cechy fenotypowe do C. dubliniensis co często wiąże się z błędną identyfikacją. Skutkuje to wtórnym zakażeniem wywołanym przez współwystepujący gatunek C. dubliniensis, który nabywa oporność na flikonazol stosowany w terapii C. albicans. Celem badań była konstrukcja układu diagnostycznego...
-
'21/'22 Badanie żywności techniką PCR
e-Learning CoursesCEL: Student identyfikuje i klasyfikuje patogeny oraz grzyby toksynotwórcze w żywności i ocenia ich szkodliwość. Przedstawia podstawowe systemy diagnostyczne, stosowane do wykrywania zafałszowań w żywności. Wyjaśnia zasady działania techniki PCR.
-
'23/'24 Badanie żywności techniką PCR
e-Learning Courses -
Amplification of a single-locus variable-number direct-repeats with restriction fragment length polymorphism (DR-PCR/RFLP) for genetic typing of Acinetobacter baumannii strains
PublicationW celu poszukiwania nowych metod typowania genetycznego szczepów Acinetobacter baumannii przydatnych w szpitalnych badaniach epidemiologicznych przeprowadzono analizę dostępnych w banku genów sekwencji szczepów referencyjnych na obecność nowych motywów repetytywnych. Do badania polimorfizmu sekwencji repetytywnych w szczepach Acinetobacter sp. wykorzystano proste powtórzenia typu "direct repeat" (DR) zlokalizowane w jednym miejscu...
-
Motility activity, slime production, biofilm formation and genetic typing by ERIC-PCR for Pseudomonas aeruginosa strains isolated from bovine and other sources (human and environment)
PublicationThe molecular-typing strategy, ERIC-PCR was used in an attempt to determine the genomic relationship of 28 P. aeruginosa strains isolated from faeces of healthy bovine, bovine mastitis and from faeces of hospital patients as well as from environment. ERIC-PCR fingerprinting revealed large molecular differentiation within this group of isolates. Twenty two out of 28 strains tested generated unique patterns of DNA bands and only...
-
Identification of leaf rust resistance genes Lr34 and Lr46 in common wheat (Triticum aestivum L. ssp. aestivum) lines of different origin using multiplex PCR
Publication -
'22/'23 Badanie żywności techniką PCR - KID
e-Learning CoursesCEL: Student identyfikuje i klasyfikuje patogeny oraz grzyby toksynotwórcze w żywności i ocenia ich szkodliwość. Przedstawia podstawowe systemy diagnostyczne, stosowane do wykrywania zafałszowań w żywności. Wyjaśnia zasady działania techniki PCR.
-
Analizator PCR
Research Equipment -
Laboratorium PCR
Laboratories -
CaZnO-based nanoghosts for the detection of ssDNA, pCRISPR and recombinant SARS-CoV-2 spike antigen and targeted delivery of doxorubicin
PublicationOverexpression of proteins/antigens and other gene-related sequences in the bodies could lead to significant mutations and refractory diseases. Detection and identification of assorted trace concentrations of such proteins/antigens and/or gene-related sequences remain challenging, affecting different pathogens and making viruses stronger. Correspondingly, coronavirus (SARS-CoV-2) mutations/alterations and spread could lead to overexpression...
-
Beata Krawczyk dr hab.
PeopleBeata Krawczyk, PhD, Professor Academic degrees, education, qualifications: B. Krawczyk earned his master degree in Biology at the University of Gdansk, Biology Faculty, in 1986, and her PhD in Molecular Biology at the University of Gdansk, Biology Faculty, in 1996. Postdoctoral degree (habilitation) in biological sciences in the discipline biology, Faculty of Natural Sciences, University of Szczecin, Szczecin, in 2009. In 2012...
-
Józef Kur prof. dr hab.
People -
Paweł Filipkowski dr inż.
PeoplePaweł Filipkowski Ph.D. Biotechnology Department of Chemistry, Technology and Biotechnology of Food Faculty of Chemistry Gdansk University of Technology Narutowicza 11/12 80-233 Gdansk, Poland Tel: +48 58 3472456 e-mail: pawel.filipkowskiATpg.edu.pl Current position: Assistant Professor/Senior Lecturer*(from Jan.2019) of Biotechnology, Department of Chemistry, Technology and Biotechnology of Food, Gdansk University of Technology. Education: Eng....
-
A universal method for the identification of genes encoding amatoxins and phallotoxins in poisonous mushrooms
PublicationABSTRACT Background. As the currently known diagnostic DNA targets amplified in the PCR assays for detection of poisonous mushrooms have their counterparts in edible species, there is a need to design PCR primers specific to the genes encoding amanitins and phallotoxins, which occur only in poisonous mushrooms. Objective. The aim of the study was testing of PCR-based method for detection of all genes encoding hepatotoxic cyclic...
-
A new assay for the simultaneous identification and differentiation of Klebsiella oxytoca strains.
PublicationKlebsiella oxytoca is the second most frequently identified species of Klebsiella isolated from hospitalized patients. Klebsiella spp. is difficult to identify using conventional methods and is often misclassified in clinical microbiology laboratories. K. oxytoca is responsible for an increasing number of multi-resistant infections in hospitals because of insufficient detection and identification. In this study, we propose a new...
-
Techniki amplifikacji kwasów nukleinowych -2022-2023
e-Learning CoursesSpecjalność: Biotechnologia molekularna (WCh), II stopnia, stacjonarne Prowadzący wykład: dr hab. Beata Krawczyk, prof. uczelni - forma stacjonarna Prowadzący laboratoria: mgr inż. Bartosz Ostrowski - zajęcia stacjonarne na PG, sala 17 WCH C. Kontakt: (58) 347-23-83 Beata Krawczyk (wykłady): e-mail: beata.krawczyk@pg.edu.pl; WCH B; p.218; Bartosz Ostrowski, WCH B, p.218 tel. (58) 347-13-83 Konsultacje: stacjonarnie we wtorki ...
-
Techniki amplifikacji kwasów nukleinowych -2021-2022
e-Learning CoursesSpecjalność: Biotechnologia molekularna (WCh), II stopnia, stacjonarne Prowadzący wykład: dr hab. Beata Krawczyk, prof. uczelni - stacjonarnie na uczelni Prowadzący laboratoria: mgr inż. Magdalena Fordon - zajęcia stacjonarne na PG, sala 17 WCH C. Kontakt: (58) 347-23-83 Beata Krawczyk (wykłady): e-mail: beata.krawczyk@pg.edu.pl; WCH B; p.218; Magdalena Fordon (laboratoria): magda.fordon@gmail.com; WCH B; p.218 Konsultacje:...
-
Techniki Amplifikacji Kwasów Nukleinowych -2023-2024
e-Learning CoursesSpecjalność: Biotechnologia molekularna (WCh), II stopnia, stacjonarne Prowadzący wykład: dr hab. Beata Krawczyk, prof. uczelni - forma stacjonarna Prowadzący laboratoria: mgr inż. Bartosz Ostrowski - zajęcia stacjonarne na PG, sala 209 WCH B (bud.7); II piętro. Kontakt: (58) 347-23-83 Beata Krawczyk (wykłady): e-mail: beata.krawczyk@pg.edu.pl; WCH B; p.217;tel. (58) 347-23-83 Bartosz Ostrowski, WCH B, p.218 tel. (58) 347-13-83 Konsultacje:...
-
Identification of anisakid nematodes from the Southern Baltic Sea usingPCR-based methods
PublicationZaproponowano metodę identyfikacji nicieni gatunków Anisakis, Hysterothyla-cium, Contracaecum przy użyciu techniki PCR/RFLP.
-
Comparative studies of the Acinetobacter genus and the species identification method based on the recA sequences
PublicationZaproponowano metodę genotypowania bakterii rodzaju Acinetobacter, opartą o analizę sekwencji genów recA, amplifikację fragmentów genu recA i analizę profili fragmentów restrykcyjnych po cięciu produktów reakcji PCR enzymami restrykcyjnymi (recA PCR/RFLP). Profile RFLP otrzymane za pomocą enzymu Tsp509I są użyteczne w identyfikacji poszczególnych gatunków bakterii rodzaju Acinetobacter. Na podstawie analizy otrzymanych sekwencji...
-
Emerging linezolid-resistant, vancomycin resistant Enterococcus faecium from a patient of a haematological unit in Poland.
PublicationOksazolidynowy antybiotyk, linezolid, jest stosowany w terapii infekcji powodowanych przez różne Gram-dodatnie bakterie, włączając w to vankomycyno-oporne enterokoki (VRE). Praca pokazuje po raz pierwszy w Polsce izolację szczepu Enterococcus faecium (LRVREF)opornego na linezolid oraz vankomycynę. Stosując techniki PCR-RFLP regionu rDNA i allelo specyficzny PCR domeny V regionu 23S rDNA wykazano obecność mutacji G2576U, identyfikowanej...
-
Konstrukcja nowych układów do diagnostyki molekularnej zakażeń o etiologii Candida spp.
PublicationDrożdżaki z rodzaju Candida należą do jednych z najczęściej izolowanych czynników etiologicznych zakażeń krwi. Szybka i bezbłędna identyfikacja gatunkowa pozwala na wdrożenie odpowiedniego leczenia i zwiększa szansę na powodzenie terapii. Celem badań była konstrukcja nowych układów wykorzystujących narzędzia diagnostyki molekularnej do specyficznej identyfikacji gatunkowej i rodzajowej drożdżaków Candida. Poszukiwano również nowych...
-
Techniki biologii molekularnej w analityce produktów mięsnych
PublicationW pracy przedstawiono możliwości wykorzystania reakcji PCR (Polymerase Chain Reaction) do identyfikacji patogennych drobnoustrojów a także do badania składu surowcowego w mięsnych produktach żywnościowych.
-
Roman Kotlowski dr hab. inż.
People -
Identification and cloning of C. albicans SC5314 genes encoding L-methionine biosynthetic pathway enzymes.
Open Research DataEnzymes of fungal L-methionine biosynthetic pathway: homoserine O-acetyltransferase (Met2p), O-acetylhomoserine sulfhydrylase (Met15p) and cystathionine-γ-synthase (Str2p) could be exploited as molecular targets for antifungal chemotherapy. The goal of the study was to identify and clone genes encoding mentioned above enzymes. MET2, MET15 and STR2 genes...
-
Rapid Assays for Specific Detection of Fungi of Scopulariopsis and Microascus Genera and Scopulariopsis brevicaulis Species
PublicationPurpose Fungi of Scopulariopsis and Microascus genera cause a wide range of infections, with S. brevicaulis being the most prevalent aetiological agent of mould onychomycosis. Proper identification of these pathogens requires sporulating culture, which considerably delays the diagnosis. So far, sequencing of rDNA regions of clinical isolates has produced ambiguous results due to the lack of reference sequences in publicly available...
-
Novel application of terminal restriction fragments length polymorphism method (t-RFLP) for identification of six clinically important Candida sp.
PublicationTerminal restriction fragments length polymorphism method (t-RFLP) is a modified classical RFLP method. The main difference is based on carrying out PCR using a fluorescently labeled primer or primers. The result of such modification is that after digestion of amplicons only terminal fragments of PCR product (containing fluorescent dye) are visualized. T-RFLP method has found application in environmental microbiology and epidemiology....
-
Fusion of Taq DNA polymerase with single-stranded DNA binding-like protein of Nanoarchaeum equitans—Expression and characterization
PublicationDNA polymerases are present in all organisms and are important enzymes that synthesise DNA molecules. They are used in various fields of science, predominantly as essential components for in vitro DNA syntheses, known as PCR. Modern diagnostics, molecular biology and genetic engineering need DNA polymerases which demonstrate improved performance. This study was aimed at obtaining a new NeqSSB-TaqS fusion DNA polymerase from the...
-
Fuzyjne polimerazy DNA – otrzymywanie, charakterystyka i zastosowanie
PublicationObecnie reakcje PCR (ang. Polymerase Chain Reaction) wykazują bardzo szerokie zastosowanie w diagnostyce medycznej, biologii molekularnej czy inżynierii genetycznej. Efektywność tych reakcji rozumiana jako wydajność i wierność przeprowadzonej amplifikacji jest nieodłącznie związana ze stosowaną polimerazą DNA i warunkami prowadzenia reakcji PCR. Aby sprostać wymaganiom stawianym przez nowoczesne metody diagnostyczne oraz współczesną...
-
Five-hour diagnosis of dermatophyte nail infections with specific detection of Trichophyton rubrum
PublicationW publikacji przedstawiono szybką dwuetapową metodę oczyszczania DNA oraz opartą na technice multiplex PCR metodę wykrywania grzybów z rodzaju dermatofitów oraz gatunku Trichophyton rubrum z hodowli grzybów oraz bezpośrednio ze zmienionych chorobowo paznokci. Testy stu osiemnastu próbek z użyciem zaprojektowanej reakcji multiplex PCR i dwóch kolejnych (jedna wykrywająca grzyby z rodzaju dermatofitów, druga wykrywająca gatunek T....
-
The effect of anthraquinone derivatives on telomerase activity
Open Research DataThe data set contains images of the PCR products obtained from the Telomerase Repeated Amplification Protocol (TRAP). The effect of anthraquinone derivatives (TXT1-TXT9) on telomerase activity was comparatively examined using the following reference compounds: BIBR1532, TMPyP4 and mitoxantrone (MTX).
-
Retrospective analysis of genetic diversity of Klebsiella oxytoca isolated in Poland over a 50-year period.
PublicationAnaliza genetyki populacji i określenie powiązań filogenetycznych pomiędzy szczepami może być niezwykle użytecznym podejściem w określaniu rozprzestrzeniania się wzorów genetycznych różnych gatunków bakterii na potrzeby epidemiologiczne. Nie ma danych, które opisywałyby długoterminowe sytuacje epidemiologiczne powodowane przez wielolekooporne, oportunistyczne szczepy Klebsiella oxytoca metodami molekularnymi. Celem przedstawionych...
-
The effect of anthraquinone derivatives (C1-C9) on telomerase activity
Open Research DataThe data set contains images of the PCR products obtained from the Telomerase Repeated Amplification Protocol (TRAP). The effect of anthraquinone derivatives (C-C9) on telomerase activity was analyzed using lysates from drug-treatedcancer cell line.
-
Experimental guinea pig model of dermatophytosis: a simple and useful tool for the evaluation of new diagnostics and antifungals
PublicationCelem badań było opracowanie prostego modelu zwierzęcego (świnki morskie) odpowiedniego do sprawdzania systemów diagnostycznych oraz terapii infekcji dermatofitów. Następujące zmienne były analizowane: przygotowanie skóry przez golenie versus użycie taśmy, testowy szczep Microsporum canis czy Trichophyton mentagrophytes jako czynnik etiologiczny, sposób inokulacji. Przebieg infekcji był oceniany poprzez ocenę zaczerwienienia i...
-
Sequences of internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2 of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi
Open Research DataDNA encoding ITS1-5.8S-ITS2 fragments of psychrotolerant pigment-producing yeast-like fungi named Red, Pink and Black were PCR amplified using ITS1 5' TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3' and ITS4 5’ TCCTCCGCTTATTGATATGC 3’ primers and sequenced by Sanger method using the same primers.
-
Personal history of chemotherapy for neoplastic disease - Female, 65 - Tissue image [6130730026858401]
Open Research DataThis is the histopathological image of BREAST tissue sample obtained in Medical University Gdańsk and deposited in ZMDL-GUMED. The sample image was taken using: Pannoramic 1000 slide scanner (20x magnification) and saved to DICOM format.
-
Personal history of chemotherapy for neoplastic disease - Female, 69 - Tissue image [6130730026856731]
Open Research DataThis is the histopathological image of BREAST tissue sample obtained in Medical University Gdańsk and deposited in ZMDL-GUMED. The sample image was taken using: Pannoramic 1000 slide scanner (20x magnification) and saved to DICOM format.
-
Personal history of chemotherapy for neoplastic disease - Female, 65 - Tissue image [6130730026859701]
Open Research DataThis is the histopathological image of BREAST tissue sample obtained in Medical University Gdańsk and deposited in ZMDL-GUMED. The sample image was taken using: Pannoramic 1000 slide scanner (20x magnification) and saved to DICOM format.
-
Personal history of chemotherapy for neoplastic disease - Female, 65 - Tissue image [613073002685551]
Open Research DataThis is the histopathological image of BREAST tissue sample obtained in Medical University Gdańsk and deposited in ZMDL-GUMED. The sample image was taken using: Pannoramic 1000 slide scanner (20x magnification) and saved to DICOM format.